防治番茄灰霉病的枯草芽胞杆菌BAB-1粉尘剂研制 (1).pdf

34199-108 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2018 年 2 月 收稿日期 2017-09-25 基金项目公益性行业（农业）科研专项（ 201303025） ；国家重点研发计划（ 2017YFD0201100） ；河北省财政专项（ F17C10007） ；河北省人才培养工程 作者简介赵卫松，博士，助研， E-mail ； *通信作者，李社增，硕士，研究员， E-mail ；马平，博士，研究员， E-mail 。 DOI 10.16409/ki.2095-039x.2018.01.012 防治番茄灰霉病的枯草芽胞杆菌 BAB-1粉尘剂研制 赵卫松，鹿秀云，郭庆港，王培培，商俊燕，年冠臻，张晓云，董丽红，李社增*，马 平*（河北省农林科学院植物保护研究所 /河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心 /农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室， 保定 071000） 摘要 目前我国农药登记的微生物杀菌剂主要为水剂和可湿性粉剂两种剂型。为了克服常规喷雾导致温室大棚内湿度增加给防病带来的不利影响，本文以枯草芽胞杆菌 BAB-1 为有效成分开展了粉尘剂研究，通过对载体和助剂的筛选，明确了最佳的载体、助剂种类及其比例，最终确定 100 亿 CFU/g 枯草芽胞杆菌BAB-1 粉尘剂的配方为滑石粉 20、分散剂 GY-D900 2、菌株 BAB-1 原药补足至 100。该制剂具有很好的悬浮效果（ 30 min 时悬浮率 ＞ 50） 。室内盆栽试验表明，菌株 BAB-1 粉尘剂对番茄灰霉病防效达到 57.14～ 71.43，对黄瓜灰霉病的保护作用优于治疗作用，施用 1 次的防病效果分别为 48.80和1.65；温室大棚试验结果表明，该制剂在番茄大棚中施用 3 次后对灰霉病的防效达到 79.04，对照化学药剂嘧菌酯 800 倍水溶液的防效为 82.55。该研究结果为枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂的进一步产业化开发和应用提供了科学依据。 关 键 词 枯草芽胞杆菌；相容性；粉尘剂；番茄灰霉病；防治效果 中图分类号 S476 文献标识码 A 文章编号 1005-9261201801-0099-10 A Preparation of Bacillus subtitles BAB-1 DPC against Tomato Gray Mold ZHAO Weisong, LU Xiuyun, GUO Qinggang, WANG Peipei, SHANG Junyan, NIAN Guanzhen, ZHANG Xiaoyun, DONG Lihong, LI Shezeng*, MA Ping*IPM Center of Hebei Province/Key Laboratory of Integrated Pest Management on Crops in Northern Region of North China, Ministry of Agriculture/Institute of Plant Protection, Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences, Baoding 071000, China Abstract In present, wettable powder and aqueous solutions is the main types of microbial fungicide ulations in pesticide registration of China. Humidity was increased by the conventional spray in greenhouse, in order to overcome the adverse effects for the disease prevention and control, Bacillus subtitles BAB-1 was used as active ingredient to develop the dust powder concentrate DPC. After carefully screening the suitable factors including carrier and additives, the optimal carrier, additive and their proportions were determined and employed for 1010 BAB-1 DPC ulation including talcum powder 20, dispersing agent GY-D900 2, up to 100 by BAB-1 technical material. This preparation of BAB-1 DPC had a excellent suspension rate more than 50 at 30 min. Pot experiment showed that the control efficacy of BAB-1 DPC was reached 57.14 to 71.43, and the protective effect was superior to therapeutic action against tomato gray mold with control efficacy reached 48.80 and 1.65 after applying once, respectively. In greenhouse experiment, the control efficacy of BAB-1 DPC and chemical fungicide azoxystrobin 800-fold aqueous solution after applying 3 times were 79.04 and 82.55, 100 中 国 生 物 防 治 学 报 第 34 卷 respectively. The research results provided a scientific basis for further industrial development and application of Bacillus subtitles BAB-1 DPC. Key words Bacillus subtitles; compatibility; dust powder concentrate DPC; tomato gray mold; control effect 灰霉病是由灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 引起的一类重要真菌病害[1]，在温室大棚等保护地栽培蔬菜上危害尤为严重[2,3]。随着保护地蔬菜种植面积的快速发展，经济价值较高的蔬菜如黄瓜、番茄等单一种植，灰霉病发生越来越重，常造成减产 20～ 30，甚至绝收[4]。该病害的防治历来依赖于化学杀菌剂，但引起该病的病原菌寄主范围广、繁殖快且遗传变异频繁，极易对化学杀菌剂产生抗性，使得化学药剂的防治效果不断下降[4-7]，进一步造成农民频繁大剂量施用化学杀菌剂，导致防治成本不断提高，同时导致高水平化学农药残留。因此，研制开发高效环保的微生物杀菌剂成为植物保护工作者的研究热点。 目前，微生物杀菌剂以其环境友好性和适应性强在生防菌中得到越来越多的关注[8,9]。我国已成功开发并投入生产的以枯草芽胞杆菌为有效成分的制剂主要有萎菌净、百抗、麦丰宁、纹曲宁等，涉及到的剂型包括可湿性粉剂、片剂、悬浮剂、粒剂[10-16]，其中主要以水剂和可湿性粉剂为主。据中国农药信息网统计，在防治番茄灰霉病上，我国登记的微生物杀菌剂主要成分包括枯草芽胞杆菌、木霉和荧光假单胞杆菌，登记制剂 13 个，其中 11 个制剂为可湿性粉剂， 2 个制剂为水分散粒剂，应用方式均为喷雾使用。 已有许多文献和生产实践表明温室大棚中作物灰霉病的发生与流行，直接与作物栽培环境的湿度密切相关[17,18]。化学杀菌剂和微生物杀菌剂，在作物灰霉病防治应用中均采用喷雾处理，加大了温室大棚中湿度，进一步加重了作物灰霉病的发生[18-20]。 枯草芽胞杆菌 BAB-1 是河北省农林科学院植物保护研究所植物病害生物防治实验室筛选到的对番茄灰霉病具有很好防治效果的菌株，已获得中国发明专利授权（专利证号 ZL200710121275.0）。以该菌株为有效成分开发了 80 亿 CFU/mL 枯草芽胞杆菌悬浮剂（登记证号 PD20150190）已在新沂中凯农用化工有限公司实现产业化。为了克服常规喷雾导致温室内湿度增加给番茄灰霉病防治带来的不利影响，着重研究非喷雾应用的制剂非常必要。然而目前有关粉尘剂的研制与应用方面的报道较少。因此，本研究拟以菌株 BAB-1 为有效成分，开展用于温室大棚中喷粉使用的粉尘剂研究，以期为枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂的进一步开发和应用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 供试材料 枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis BAB-1 和番茄灰霉病菌 Botrytis cinerea，均由河北省农林科学院植物保护研究所植物病害生物防治实验室分离、鉴定和保存。其中菌株 BAB-1 于 2007 年保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No. 2099。 LB 培养基用于枯草芽胞杆菌 BAB-1 的培养， PDA 培养基用于灰霉病菌的培养。载体及助剂轻质碳酸钙、高岭土、膨润土、滑石粉均购自天津市奥湛医科医药销售有限公司，陶土购自上海源叶生物科技有限公司；助剂主要包括 MF、 GY-WS01、GY-D800、 GY-D06、 GY-D10、 GY-D900、 GY-DM02 均购自北京广源益农化学有限责任公司，木质素磺酸钠购自上海源叶生物科技有限公司，十二烷基苯磺酸钠（ DBS）、十二烷基硫酸钠（ SDS）均购自天津科密欧化学试剂有限公司， GF/A 玻璃微纤维滤纸（ 10 cm 10 cm， Whatman）。 1.2 枯草芽胞杆菌 BAB-1 原药的制备 将枯草芽胞杆菌 BAB-1 在 LB 培养基平板上划线培养进行活化，然后挑取单菌落在克氏瓶（ LB 培养基）中划线接种， 35 ℃培养 7 d 用作发酵种子。将准备好的发酵种子（ 4 瓶）克氏瓶培养的枯草芽胞杆菌BAB-1 菌苔用无菌刮铲刮下，每瓶用 100 mL 无菌水配置成孢子悬浮液（浓度为 108 cfu/mL），接入 1 t 种子发酵罐， 31 ℃培养 12 h 后作为种子液转入 5 t 生产发酵罐， 31℃、 180 r/min 培养 48 h， 即得到菌株 BAB-1发酵液。在发酵液中添加 10陶土（粒径 26.67 μm）进行喷雾干燥得到菌株 BAB-1 原药。采用平板菌落计数法检测菌株 BAB-1 原药中活菌含量为 2 1010CFU/g。 第 1 期 赵卫松等防治番茄灰霉病的枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂研制 101 1.3 载体或助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的生物相容性 在试验质量浓度（ 1、 2、 3和 4）范围内，供试助剂与 LB 培养液混合时存在完全溶解、产生颜色和不溶解（产生沉淀） 3 种情况。（ 1）生长量测定法针对助剂与 LB 培养液完全溶解的处理，采用生长量测定法评价助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的相容性。参考孙朝华等[21]方法，并略作修改。将保存的菌株 BAB-1 转接到 LB 平板上活化，经划线分离培养 24 h 后，挑取单菌落接种于 LB 培养液中，在 30 ℃、180 r/min 的摇床里培养 24 h，作为后续试验的种子液。在 250 mL 三角瓶中，将 1的种子液接种于含有上述质量浓度助剂的 100 mL 培养液中，在 pH 7.0、 30 ℃和 180 r/min 振荡培养 24 h。利用酶标仪测定 OD600的吸收值来表示菌株 BAB-1 的生长量。每个浓度 3 次重复，以不添加助剂菌株 BAB-1 的生长量为对照。（ 2）毒性平板法针对助剂与 LB 培养基产生沉淀或颜色的问题，采用平板培养法评价助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的相容性。参考李姝江等[11]方法，并略作修改。称取一定质量的供试助剂按照 1、 2、 3、4的质量浓度分别加入到 LB 培养基中，制得固体平板，划线接种菌株 BAB-1，培养 24 h 后考察其生长情况。每个浓度 3 次重复，以不添加助剂菌株 BAB-1 生长情况为对照。筛选出对菌株生长没有影响的载体和助剂。 以沉降率为评价指标，将不同载体与 BAB-1 原药混合对其悬浮效果进行评价，参考李宝聚等[23]评价方法，即喷粉 30 min 后沉降率＜ 50，认为在空气中能够达到很好的悬浮效果。通过将不同载体与菌株BAB-1 原药混合后的沉降率进行测定，筛选最佳载体。根据载体与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的生物相容性和粒径测定结果， 将 3 种载体与 BAB-1 混合后分别记作配方 A（滑石粉 BAB-1 原药） 、 配方 B（皂土 BAB-1原药）和配方 C（陶土＋ BAB-1 原药）。 1.4 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂的加工与配比优化 将上述获得的菌株 BAB-1 原药、相容性好的载体、助剂分别经气流粉碎机（江阴新友机械制造有限公司）处理后，按照一定比例置于 SYH 三维混合机中（上海尘鑫粉体设备有限公司）混合均匀加工成不同的粉尘剂。 其配比如下 （按质量百分比计， w/w） 载体 20、 润湿剂 0～ 2、 分散剂 0～ 2、 菌株 BAB-1原药补足至 100。利用平板菌落计数法测定其含菌量。 1.5 样品加工后主要质量指标检测 1.5.1 粒径测定 利用激光粒度分布仪（ BT-9300HT，丹东百特仪器有限公司）测定粒径的大小。首先使用碳酸钙标样对仪器进行校正，选定背景值，然后将循环池用蒸馏水清洗干净后加入待测样品，遮光率调整到 10～ 20停止加样，打开超声波分散 3 min，使其充分混匀。记录样品在 D10、 D50、 D90、 D98时的粒径大小，每个样品 3 次重复。 1.5.2 沉降率测定 参考周劲松等[22]方法，并稍作修改。采用称重法评价悬浮效果，将一定面积的玻璃微纤维滤纸平铺于密闭空间地面，通过计算密闭空间地面滤纸上的沉降量，折算出总面积的沉降量，最终得到喷粉试验后的沉降率。 1.6 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对灰霉病的防治效果评价 1.6.1 室内效果评价 通过离体叶片法和盆栽法开展枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对灰霉病防治效果研究。 离体叶片法选择大小、叶龄基本一致的健康番茄叶片，去除叶片表面灰尘，用蘸水的脱脂棉包裹住叶柄保湿，置于铺有滤纸的培养皿中。在温室放置干净的纸板，将装有叶片的培养皿置于其上，打开培养皿，开始喷粉作业，在喷粉完成后的 30、 60 和 120 min，盖上培养皿，置于 25 ℃恒温培养 24 h，在所有叶片的叶背叶脉处接种活化培养的灰霉菌（ Φ＝ 5 mm）， 25 ℃恒温光照 /黑暗（ 16 h/8 h）培养 3～ 5 d 观察发病情况。以未喷粉尘剂的叶片为对照，每个处理 4 次重复，每次重复 20 个叶片。测量椭圆形病斑的长直径和短直径，按照以下公式计算发病面积和防治效果。发病面积＝ πab/4，其中 a 和 b 分别为长直径和短直径；防治效果（ ）＝空白对照的发病面积－处理的发病面积 /空白对照的发病面积 100。 盆栽法选择子叶平展、整齐一致的黄瓜苗作为试验材料。保护作用先喷施粉尘剂后接种病原菌。选择长出 2～ 3 片叶子的黄瓜苗置于温室中进行喷粉作业，待枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂沉降 24 h 后，置于人工气候箱中 25 ℃恒温光照保湿培养 24 h，然后接种活化培养的灰霉菌（ Φ＝ 5 mm），重新置于 25 ℃恒温光照保湿培养 3～ 5 d，观察发病情况。治疗作用先接种病原菌后喷施粉尘剂。在黄瓜苗子叶中央接102 中 国 生 物 防 治 学 报 第 34 卷 种活化培养的灰霉菌（ Φ＝ 5 mm），在 25 ℃恒温光照保湿培养 24 h 后，置于温室中进行喷粉作业，沉降24 h，重新置于人工气候箱中， 25 ℃恒温光照保湿培养 3～ 5 d，观察发病情况。每个处理 4 次重复，每次重复 20 株黄瓜苗。以接种灰霉病菌不喷菌株 BAB-1 粉尘剂的处理为空白对照，待其充分发病后调查各处理发病情况，按照上述公式计算发病面积和防治效果。 1.6.2 田间效果评价 2017 年于河北省定兴县华农蔬菜专业合作社（河北省定兴县贤宇镇龙华村）开展试验。番茄品种荷兰 8 号，长势整齐。试验共设 3 个处理①枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂，孢子浓度为 100亿 CFU/g；② 25嘧菌酯悬浮剂（英国先正达有限公司）；③清水对照。每个处理 4 次重复，共设 12 个小区，每个小区面积 48 m2，随机区组排列。首次施药为第二穗花开花期。病害发生之前开始第一次开始喷粉施药，以后每隔 7～ 10 d 喷施一次，粉尘剂每次用量为 15 kg/hm2， 25嘧菌酯悬浮剂使用浓度为 800 倍水稀释液，共施药 3 次。 发病调查指标包括，病株数（发病率）、发病果、发病侧枝、发病叶片数、发病主茎、发病花数。病株率是指小区面积内发病植株占总株数的百分比；发病点是指小区面积内植株发病的不同部位，包括果、叶、侧枝、主茎、花。发病点率是指小区面积内发病部位占总株数的百分比。 1.7 数据统计与分析 应用 SPSS 17.0 软件，采用邓肯氏新复极差多重比较法对试验数据进行差异显著性分析。应用 Excel软件和 Sigmaplot 12.0 软件进行数据的整理与初步计算分析。 2 结果与分析 2.1 载体或助剂对枯草芽胞杆菌 BAB-1 生长的影响 研究了助剂 MF、 GY-D800、 GY-D06、 GY-D10、 GY-D900、 GY-DM02、 GY-WS01、木质素磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠（ DBS）、十二烷基硫酸钠（ SDS），载体皂土、滑石粉、陶土与枯草芽胞杆菌 BAB-1的生物相容性。针对助剂 GY-D800、 GY-D06、 GY-D900 和 SDS，通过生物量比较结果表明（图 1 A-D）， AGY-D06 CK1234OD6000.00.20.40.60.8BSDS CK 1 2 3 4OD6000.00.20.40.60.8CGY-D800 CK1234OD6000.00.20.40.60.81.01.21.41.6DGY-D900 CK1234OD6000.00.20.40.60.81.01.21.41.6aaaaa baaaaabcddabcdd图 1 部分助剂在不同浓度下枯草芽胞杆菌 BAB-1 的生长量 Fig. 1 The growth of B. subtilis BAB-1 with the different concentrations of some additives 第 1 期 赵卫松等防治番茄灰霉病的枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂研制 103 助剂 GY-D06 和 SDS 在试验浓度范围内对菌株 BAB-1 的生长表现出很强的抑制作用（图 1A、 B），而除了浓度 4时，助剂 GY-D800 和 GY-D900 均对菌株 BAB-1 的生长呈现出促进作用。助剂 GY-D800 和GY-D900 在添加浓度分别为 2和 1时，生长量达到最大，之后随着添加浓度的增加生长量呈下降趋势（图 1C、 D）。方差分析结果表明（ P＝ 0.05），助剂 GY-D800 和 GY-D900 添加浓度为 1和 2时，菌株 BAB-1 的生长无显著差异，而与对照差异显著。 同时，进一步采用毒性平板法研究载体或助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的生物相容性。研究结果表明，载体或助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的相容性存在区别。在试验浓度范围内（ 1～ 4， w/v），除载体陶土在高浓度（ 3和 4）对菌株 BAB-1 生长有抑制作用外，皂土、滑石粉与菌株 BAB-1 相容性好，菌株BAB-1 均能够较好的生长。助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的相容性不同，助剂 MF、 GY-D10、 GY-D800、GY-D900 与菌株 BAB-1 相容性好；助剂 GY-D06、 GY-DM02、木质素磺酸钠在低浓度时（ 1和 2）与菌株 BAB-1 相容性好，随着浓度的升高对菌株 BAB-1 的生长表现抑制作用；然而助剂 GY-WS01、 DBS、SDS 在试验浓度 1～ 4时对菌株的生长均表现出抑制作用（图 2、表 1）。 表 1 载体或助剂对枯草芽胞杆菌 BAB-1 的生物相容性评价 Table 1 Bio-compatibility uation between carriers or additives and B. subtilis BAB-1 相容性 Compatibility 相容性 Compatibility 助剂 Additives 1 2 3 4 载体或助剂 Carriers or additives 1 2 3 4 MF ＋ ＋ ＋ ＋ 木质素磺酸钠 Sodium ligninsul fonate ＋ ＋ - - GY-WS01 - - - - 十二烷基苯磺酸钠 DBS - - - - GY-D800 ＋ ＋ ＋ ＋ 十二烷基硫酸钠 SDS - - - - GY-D06 ＋ ＋ - - 皂土 Bentonite ＋ ＋ ＋ ＋ GY-D10 ＋ ＋ ＋ ＋ 滑石粉 Talcum powder ＋ ＋ ＋ ＋ GY-D900 ＋ ＋ ＋ ＋ 陶土 Figuline ＋ ＋ - - GY-DM02 ＋ ＋ - - 注 “＋”表示的是相容性好； “-”表示的是相容性差。 Note “＋ ” represented good compatibility, “-” represented poor compatibility. 2.2 载体的筛选 研究结果表明，配方 A、配方 B 和配方 C 的沉降率分别为 42.69、 70.20和 48.34，配方 B 的沉降率大于 50，不符合粉尘剂的沉降要求，配方 A 优于配方 C，无显著差异，而与 B 有显著差异。因此，选择滑石粉作为枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂制备的最佳载体（图 3）。 2.3 分散剂的筛选 基于生长量测定法和毒性平板法筛选出与枯草芽胞杆菌 BAB-1 相容性好的 4 种分散剂 （ GY-D800、GY-D900、 GY-D10 和 MF）。按照分散剂 2、滑石粉 20、菌株 BAB-1 原药补足至 100，混匀，筛选制备菌株 BAB-1 粉尘剂的分散剂。试验结果表明，含有分散剂 GY-D800、 GY-D900、 GY-D10和 MF 的粉尘剂的沉降率分别为 42.56、 33.17、 43.30和 49.63， 均小于 50。 含有分散剂 GY-D800的粉尘剂沉降率与其他粉尘剂处理有显著差异，而含有分散剂 GY-D800 与 GY-D10 的粉尘剂沉降率无显著差异。因此，制备菌株 BAB-1 粉尘剂的最佳分散剂为 GY-D900，其次为 GY-D800 和 GY-D10（图 4）。 2.4 不同样品组分及其混合后的粒径测定 关于粉尘剂粒径的要求，参考李宝聚等[23]评价方法，粉碎细度要求 D90＜ 53 μm。载体陶土、滑石粉和皂土的 D90 粒径分别为 21.86、 14.24 和 33.70 μm，枯草芽胞杆菌 BAB-1 原粉的 D90 粒径为 8.19 μm。载体分别与枯草芽胞杆菌 BAB-1 混合后， D90 粒径差异显著，分别为 50.39、 31.68 和 67.14 μm。载体滑石粉、分散剂 GY-D900 与枯草芽胞杆菌 BAB-1 混合后满足粉尘剂的粒径要求，以此组分开展粉尘剂的后续研究（表 2）。 104 中 国 生 物 防 治 学 报 第 34 卷 GY-DM02 GY-D900 十二烷基硫酸钠 SDSGY-D800 GY-D06 MFGY-D10 GY-WS01 十二烷基苯磺酸钠 DBS木质素磺酸钠Sodium ligninsul fonate皂土 Bentonite 滑石粉 Talcum powder陶土 Figuline注每个图中平板从上到下，从左到右分别代表的是载体或助剂在不同浓度（ CK、 1、 2、 3和 4）的 LB 平板上菌株的生长情况。 Note The plates at each figure represent the growth of strain BAB-1 with carriers or additives in different concentrations CK, 1, 2, 3 and 4 from top to bottom, from left to right, respectively. 图 2 载体或助剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 的生物相容性（毒性平板法） Fig. 2 The bio-compatibility between carriers or additives and B. subtilis BAB-1 by of toxicity plate 2.5 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂的室内防效评价 菌株 BAB-1 粉尘剂沉降 30、 60 和 120 min 时，叶片灰霉病的发病面积分别为 1.20、 0.60 和 0.40 cm2，对照发病面积为 1.40 cm2，防病效果分别为 14.29、 57.14和 71.43。 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对黄瓜灰霉病的保护效果和治疗效果分别为 48.80和 1.65，保护作用优于治疗作用（表 3）。 第 1 期 赵卫松等防治番茄灰霉病的枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂研制 105 配方 ulaABC沉降率Sedimentation rate 020406080100aab图 3 不同载体与枯草芽胞杆菌 BAB-1 混合的沉降效果 Fig. 3 Sedimentation effects of different carriers mixed with B. subtilis BAB-1 分散剂 DispersantsGY-D800 GY-D900 GY-D10 MF0102030405060ab bc图 4 不同分散剂与枯草芽胞杆菌 BAB-1 混合后的沉降效果 Fig. 4 Sedimentation effects of different dispersants mixed with B. subtilis BAB-1 表 2 不同组分及其混合后的粒径 Table 2 Particle size of different components and its mixture 粒径 Particle size μm 样品名称 Sample name D10 D50 D90 D98 陶土 Figuline 1.66 0.35 8.34 1.04 21.86 1.49 30.35 1.68 滑石粉 Talcum powder 1.24 0.42 5.56 0.52 14.24 1.88 20.54 1.57 皂土 Bentonite 1.65 0.18 7.58 1.76 33.70 2.13 54.58 3.44 GY-D900 43.80 1.34 107.72 4.98 244.84 3.19 384.61 3.86 BAB-1 原药 BAB-1 technical material 0.69 0.11 2.75 0.34 8.19 0.83 11.56 2.17 陶土＋ GY-D900＋ BAB-1 原药 Figuline＋ GY-D900＋ BAB-1 technical material 7.66 0.19 17.29 0.71 50.39 0.73 b 61.26 0.87 滑石粉＋ GY-D900＋ BAB-1 原药 Talcum powder＋ GY-D900＋ BAB-1 technical material 1.67 0.29 10.56 0.43 31.68 0.86 a 48.55 0.35 皂土＋ GY-D900＋ BAB-1 原药 Bentonite＋ GY-D900＋ BAB-1 technical material 9.68 0.95 19.24 0.76 67.14 0.49 c 83.43 0.42 CK 30 min 60 min 120 min图 5 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对灰霉病防治效果 Fig. 5 Control effect on Botrytis cinerea by B. subtilis BAB-1 DPC 表 3 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对灰霉病的保护和治疗作用 Table 3 Protective and curative effect of B. subtilis BAB-1 DPC against B. cinerea 保护作用 Protective effect 治疗作用 Curative effect 处理 Treatment 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂 B. subtilis BAB-1 DPC 30.84 3.26 48.80 2.78 98.35 1.47 1.65 1.04 空白 CK 60.24 2.15 - 100.00 0.00 - 106 中 国 生 物 防 治 学 报 第 34 卷 2.6 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂的温室大棚试验 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对番茄灰霉病具有很好的防治效果。 第 2 次施药后 7 d 调查 （ 2017.01.10） ， 菌株 BAB-1 粉尘剂按照 15 kg/hm2施药后的病株防效和发病防效均为 100，对照药剂 25嘧菌酯悬浮剂800 倍水稀释液的病株防效和发病防效分别为 66.29和 82.61，表明 BAB-1 粉尘剂使用浓度的防效高于对照药剂，尤其是在对病株的防效方面。第 3 次施药 7 d 后调查（ 2017.01.18）， BAB-1 粉尘剂的病株防效和发病点防效分别为 71.08和 79.04，对照药剂 25嘧菌酯悬浮剂 800 倍水稀释液的病株防效和发病点防效分别为 75.93和 82.55。 不同调查时间 BAB-1粉尘剂和嘧菌酯处理的病株防效有显著差异； BAB-1粉尘剂发病点防效之间存在显著差异，呈现下降趋势，而化学药剂嘧菌酯的发病点防效无显著差异。随着用药次数的增加和病害的发展，粉尘剂对灰霉病的防治效果有所下降，化学药剂嘧菌酯仍表现出很好的防治效果（表 4）。 表 4 枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂对番茄灰霉病的防治效果 Table 4 Control effects of B. subtilis BAB-1 DPC on B. cinerea 时间 Time 处理 Treatment 病株率 Diseased plant rate 病株防效 Diseased plant control effect 发病点 Incidence rate 发病点防效 Incidence of control effect A 0.00 0.00 100 0.00 d 0 0.00 100 0.00 c B 2.08 1.26 66.29 3.17 a 2.08 0.74 82.61 4.92 b 2017.01.10 CK 6.17 1.64 - 11.96 2.37 - A 6.26 1.18 71.08 2.42 b 6.26 1.24 79.04 3.67 a B 5.21 1.66 75.93 4.83 c 5.21 2.07 82.55 6.73 b 2017.01.18 CK 21.64 3.23 - 29.85 2.86 - 注 A 表示的是枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂， B 表示的是嘧菌酯 800 倍。 Note A represented B. subtilis BAB-1 DPC, B represented azoxystrobin 800 folds. 3 讨论 枯草芽胞杆菌以其环境适应性和环境友好性在生防菌中得到越来越多的关注。微生物农药粉尘剂喷施后可以在空气中产生更好的悬浮效果和更强的叶片附着性，从而可以对温室作物病虫害有更好的防治效果。 载体对制剂的润湿性和悬浮率有主要影响[12]，而助剂不仅可以提高防效，延长货架期，还能降低成本。已有研究表明，为了减弱载体和助剂对生防菌剂抑菌活性的影响，需要筛选与生防菌株具有较好相容性的载体和助剂。关于微生物与载体和助剂相容性的研究报道很多，钱一鑫等[12]通过对载体、分散剂、润湿剂、稳定剂、保护剂的筛选，确定了内生解淀粉芽胞杆菌 X17 可湿性粉剂最佳配方。孙朝华等[21]研究发现木质素磺酸钠对苹果树腐烂病生防菌解淀粉芽胞杆菌 TS-1203 的活性影响较小，可作为生防制剂开发的助剂。潘以楼等[24]研究了不同农药助剂对稻瘟病生防菌短短小芽胞杆菌 Bacillus pumilus TW-2 活性的影响，发现木质素磺酸钠和篦麻油聚醚的影响最小。然而有关制备粉尘剂的载体和助剂的研究较少。本研究通过单因素试验，确定了枯草芽胞杆菌 BAB-1 粉尘剂的最佳载体和分散剂及其比例，即配方为滑石粉 20、分散剂 GY-D900 2、原粉补足至 100。研究结果与前人结论存在一定差异，其原因可能是不同剂型的特性决定和不同生防菌株生物学及生物化学特性不同。此外，本研究未筛选出与枯草芽胞杆菌 BAB-1 具有较好相容性的润湿剂，应进一步加强润湿剂的筛选，增加药剂对作物的附着性。同时，开展载体或助剂对芽孢形成的影响研究。 室内生物活性测定结果及田间温室大棚药效试验结果均显示， 10