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黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基因型分析.pdf

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黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基因型分析.pdf

p黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和 multi -locus 基因型分析 张铉哲 韩晓旭 郭衍锦 李 璐 李媛媛 (东北农业大学农学院,黑龙江哈尔滨 150030) 摘 要2015~2017年在黑龙江省哈尔滨市、绥化市和齐齐哈尔市各马铃薯主产区共采集分离了126株马铃薯晚疫病菌菌 nbsp;株,测定交配型、mtDNA单倍型、SSR基因型并进行multi-locus基因型分析。结果显示,126株菌株中发现了A1、A2、自 育型3种交配型,分别占分离菌株总数的88.1%、6.3%和5.6%。126株菌株中共鉴定出Ⅰa和Ⅱa两种mtDNA单倍型,分别 占分离菌株总数的17.5%和82.5%。126株菌株中共鉴定出7种SSR基因型,分别为F-01、F-02、F-03、F-05、F-06、D-03 和G-02,其中F-01基因型(77.8%)为优势基因型。根据马铃薯晚疫病菌的mtDNA单倍型和SSR基因型,共划分了9种 multi-locus基因型,其中multi-locus基因型A(65.1%)是黑龙江省发现的优势基因型。2015~2017年黑龙江省马铃薯晚疫 病菌群体结构逐年复杂,绥化市马铃薯晚疫病菌群体结构最为复杂。 关键词马铃薯晚疫病菌;交配型;mtDNA单倍型;SSR基因型;multi-locus基因型 型,其出现频率仅为2.2%。王腾等(2016)对 2011~2013年在黑龙江采集的菌株进行交配型测 定,A1交配型占菌株总数的51.63%,其余为A2 交配型。这些研究表明晚疫病菌由于不同交配型的 出现,可以在田间进行有性生殖和无性繁殖,导致 晚疫病菌群体结构发生变化。晚疫病菌群体结构变 化对晚疫病害的防治提出了新的挑战,因此研究马 铃薯晚疫病菌群体遗传结构变化具有重要意义。 线粒体基因组具有结构简单、无组织特异性等 优点,采用检测线粒体多态性方法研究晚疫病菌群 体遗传结构变化效果更佳(May amp; Ristino,2004)。 对马铃薯晚疫病菌线粒体DNA(mtDNA)多态性 进行研究,逐步成为国内外研究热点。Griffith和 Shaw(1998)采用改进PCR-RFLP方法将线粒体单 倍型分为Ⅰa、Ⅱa、Ⅰb、Ⅱb。Rojas和Kirk(2016) 研究表明,2008~2010年在密歇根州采集分离的 124株致病疫霉的mtDNA单倍型均为Ⅰa型。Tian 等(2016)鉴定了中国西北地区采集分离的马铃 薯晚疫病菌mtDNA单倍型,结果检测到Ⅰa、Ⅱa 和Ⅱb 3种单倍型,其中Ⅰa为优势基因型。徐生军 (2010)利用PCR-RFLP方法,对黑龙江省采集分 离的马铃薯晚疫病菌进行mtDNA单倍型检测,共 张铉哲,男,博士,教授,硕士生导师,专业方向植物病害综合防治, E- nbsp; 收稿日期2017-11-13;接受日期2018-03-06 基金项目黑龙江省自然科学基金项目(C2016019) ,黑龙江省经济作 物现代农业产业技术协同创新体系项目(HNWJZTX201701) 中国是马铃薯生产大国,马铃薯已成为继小 麦、玉米之后的第三大作物,种植面积和产量居于 世界首位(王立 等,2013) 。黑龙江省因得天独厚 的冷凉气候和地理条件,成为我国马铃薯主产区之 一(关红颖,2011) 。然而,近几年由于黑龙江省 降雨量大等天气原因,马铃薯晚疫病发生十分严重。 马铃薯晚疫病是由致病疫霉Phytophthora nbsp;infestans引起的马铃薯毁灭性病害,可造成巨大的 经济损失(金光辉 等,2017) 。马铃薯晚疫病菌通 过不同交配型菌株之间异宗配合进行有性生殖,有 性生殖可产生卵孢子,卵孢子可在土壤中越冬,成 为翌年的初侵染源。不同交配型同时存在时说明马 铃薯晚疫病菌适应性和变异性增强(闵凡祥 等, 2010)。Gallegly和Galindo(1958)在墨西哥中部首 先发现了A1和A2交配型。张志铭等(1996)首 次在国内报道了A2交配型菌株。朱杰华(2004) 首次在黑龙江采集分离的菌株中鉴定出A2交配 nbsp;58 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;58 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 2018(4)58 - 64 检测到Ⅰa和Ⅱa两种单倍型。可见,4种单倍型在 不同国家和地区的分布具有一定差异。 SSR标记具有多态性高、重复性好、数量丰富、 发生频率高、批量操作等优点(李建武,2011) , 近些年成为研究马铃薯晚疫病菌群体遗传多样性的 主要方法。对采自黑龙江的致病疫霉进行SSR基因 型分析,吴艳清等(2012)鉴定出8种基因型,F-01 型所占比例最高。而王晨(2013)的鉴定结果表明, 从黑龙江采集的菌株共鉴定出6种SSR基因型,F-01 为优势基因型。这些研究表明,黑龙江省马铃薯晚 疫病菌的SSR基因型呈现一种动态变化。 Runno-Paurson等(2016)对爱沙尼亚的马铃 薯晚疫病菌进行交配型和SSR基因型测定,结果表 明该地区出现不同交配型菌株,SSR基因型也趋于 多样化。Rekad等(2017)通过SSR标记分析、交 配型和瑞毒霉敏感性的测定,对阿尔及利亚西北部 地区的致病疫霉进行系统分析,结果表明不同交配 型的菌株其对应的优势SSR基因型有差异。Guo等 (2010)通过交配型、同工酶基因型、mtDNA单倍 型和RG57指纹的分析,发现中国地区的马铃薯晚 疫病菌基因型和表现型与其他国家有差异。 我国缺少对马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型 的研究。本试验首先测定黑龙江省马铃薯晚疫病菌 的交配型;其次,利用PCR-RFLP方法和SSR标 记测定黑龙江省马铃薯晚疫病菌的mtDNA单倍型 和SSR基因型;第三,利用mtDNA单倍型和SSR 基因型确定黑龙江省马铃薯晚疫病菌的muti-locus 基因型;最终,分析交配型与muti-locus基因型的 相互关系。以期为马铃薯晚疫病菌的群体遗传研究 和马铃薯晚疫病的防治提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 供试菌株及培养基 2015~2017年,在黑龙江省齐齐哈尔市、绥 化市、哈尔滨市各马铃薯主产区采集具有马铃薯晚 疫病主要症状的单病斑叶片,将马铃薯切成约0.5 nbsp;cm的薯片,用70酒精将切后的薯片消毒,将病 叶放入灭菌后的选择性培养基中,把消毒处理后的 薯片放在病叶上,加入一定的蒸馏水,用封口膜封 盖,19 ℃黑暗培养箱中培养4~6 d。 供试培养基为20番茄汁琼脂培养基和选择 性培养基(张铉哲和徐生军,2010)。 1.2 马铃薯晚疫病菌的交配型测定 交配型的测定采用对峙培养法,使用20番 茄汁琼脂培养基。将标准菌株A1(DN-3085日本)、 A2(TBC-3韩国)与待测菌株预培养,然后将标 准菌株和待测菌株菌饼分别与A1、A2标准菌株对 峙培养,菌饼之间距离为3 cm。封盖,每个菌株重 复测定3次,19 ℃恒温培养14 d,在显微镜下观察 菌落交界处是否产生卵孢子。若待测菌株与A2标 准菌株之间产生卵孢子,且与A1标准菌株间不产 生卵孢子,说明所测菌株是A1交配型;相反,则 是A2交配型。若与2个标准菌株间都产生卵孢子, 且自身也可产生卵孢子,则待测菌株类型为自育型。 1.3 DNA提取 将待测菌株接种到20番茄汁琼脂培养基 中,每株菌株接种3皿,19 ℃黑暗培养箱中培养 14 d左右,用灭过菌的滤纸吸干菌丝上的水分,装 入1.5 mL EP管中,-20 ℃下保存用于DNA的提取。 参考Goodwin等(1992)的方法提取基因组DNA。 1.4 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型测定 1.4.1 引物序列与扩增体系 线粒体DNA单 倍型分析的PCR-RFLP方法参考Griffith和 Shaw(1998)的方法。引物序列P2F2 5′- TTCCCTTTGTCCTCTACCCAT-3′,R2 5′-TTACGGCGGTTTAGCACATACA-3′;P4F4 5′-TGGTCATCCAGAGGTTTATGTT-3′,R45′- nbsp;CCGATACCGATACCAGCACCAA-3′。所用引物由 生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PCR扩 增体系和程序参考Zhang等(2006)的方法。 1.4.2 酶切体系 目的片段回收采用核酸回收试剂 盒〔生工生物工程(上海)股份有限公司〕 。P2引 物扩增片段使用 Msp Ⅰ酶切,P4引物扩增片段使用 EcoR Ⅰ酶切,酶切体系为50 μL胶回收产物10 nbsp;μL,Buffer 5 μL,Enzyme 1 μL,ddH 2 O补足至50 nbsp;μL。反应条件为37 ℃水浴3 h。将酶切产物与溴 酚蓝混合,采用1.5琼脂糖凝胶电泳检测,用凝 胶成像仪拍照。 1.5 马铃薯晚疫病菌SSR基因型测定 1.5.1 SSR引物序列与扩增体系 马铃薯 晚疫病SSR基因型划分标准参考Knapova 和Gisi(2002) 的 方 法。 引 物 序 列Pi4B nbsp;59 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;59 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES F5′ -AAAATAAAGCCTTTGGTTA-3′ ,R 5′-GCAAGCGAGGTTTGTAGATT-3′;Pi4G F5′-CGCTGTGTGGATGACAAGTA-3′,R 5′-TCGACCTGACATACGAGCTA-3′。SSR扩增体 系和扩增程序参考王晨(2013)的方法。 1.5.2 聚丙烯凝胶电泳检测 将扩增后的样品与同 体积的Loading Buffer混合,95 ℃变性10 min,扩 增产物用12的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染 染色,用凝胶成像系统拍照(Gene Company Limited nbsp;GBOX-CHEMI-XRQ)。 2 结果与分析 2.1 马铃薯晚疫病菌分离 2015~2017年在黑龙江省哈尔滨市、绥化市 和齐齐哈尔市各马铃薯主产区共采集分离了126株 马铃薯晚疫病菌菌株(表1)。 表1 黑龙江省马铃薯晚疫病菌菌株信息 采集年份 采集地区 菌株数 2015 齐齐哈尔 16 绥化 2 哈尔滨 4 2016 绥化 26 哈尔滨 6 2017 绥化 35 齐齐哈尔 37 2.2 马铃薯晚疫病菌交配型分析 在黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病 菌菌株中共发现了3种交配型。A1、A2和自育 型菌株分别占所分离菌株总数的88.1%、6.3%和 5.6%。从采集年份分析结果显示,2015年采集的 22株菌株中,共鉴定出A1和A2 2种交配型,其 中,21株菌株为A1交配型(95.5%),仅1株菌 株为A2交配型(4.5%)。2016年采集的32株菌 株中共鉴定出3种交配型,其中26株A1交配型 菌株(81.3%),4株A2交配型(12.5%),2株自 育型(6.2%)。2017年共分离鉴定了72株菌株, 3株菌株为A2交配型(4.2%) ,5株菌株为自育型 nbsp;(6.9%),其余64株菌株为A1交配型(88.9%), 由此可见,自育型菌株比例逐年增长,各年份之间 A1交配型所占比例具有差异。 从采集地区分析结果显示,哈尔滨市采集分 离的菌株均为A1型(100%) ,绥化市采集分离的 菌株共鉴定出3种交配型,56株为A1交配型菌株 (88.9%),5株为A2交配型菌株(7.9%),2株 为自育型菌株(3.2%) 。齐齐哈尔市采集分离的菌 株共测定出A1、A2和自育型3种,分别为46株 (86.8%)、2株(3.8%)和5株(9.4%) 。以上结 果显示,哈尔滨市马铃薯主产区与其他2个马铃薯 主产区相比晚疫病菌交配型相对单一,各地区之间 不同交配型所占百分比具有明显差异。 2.3 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型分析 黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病菌菌 株共鉴定出Ⅰa和Ⅱa 2种mtDNA单倍型,其中104 株菌株为Ⅱa单倍型(82.5%) ,22株菌株为Ⅰa单倍 型(17.5%) 。从采集年份分析结果显示,2015年 测定的22株菌株中,共测定出19株Ⅱa单倍型菌 株(86.4),3株为Ⅰa单倍型菌株(13.6)。2016 年分离鉴定的32株菌株中,24株为Ⅱa单倍型菌株 (75.0),其余8株为Ⅰa单倍型菌株(25.0%)。 2017年分离的72株菌株中,11株为Ⅰa单倍型菌株 (15.3%),61株为Ⅱa单倍型菌株(84.7%)。2015 年所鉴定菌株中Ⅱa单倍型比例最高。 从采集地区分析结果显示,哈尔滨市采集分离 的菌株均为Ⅱa单倍型(100%) ,绥化市分离的63 株菌株中,共鉴定出Ⅰa和Ⅱa 2种单倍型,分别为 15株(23.8%)和48株(76.2%)。齐齐哈尔市鉴 定的53株菌株中,46株为Ⅱa单倍型(86.8%),7 株为Ⅰa单倍型(13.2%) 。可见哈尔滨市马铃薯主 产区mtDNA单倍型单一,各地区马铃薯晚疫病菌 不同mtDNA单倍型所占比例具有明显差异。 2.4 马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析 对黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病菌 菌株进行SSR基因型分析,共鉴定出7种基因型, 分 别 为F-01、F-02、F-03、F-05、F-06、D-02 和G-02。其中F-01基因型菌株共鉴定出98株 (77.8%),F-05基因型为12株(9.5) ,F-03基 因型菌株为7株(5.5%),D-02基因型菌株为4株 (3.2%) ,F-06基因型菌株为3株(2.4%),F-02 基因型和G-02基因型分别鉴定出1株(0.8%)。 从采集年份来看(图1) ,2015年分离鉴定的 22株菌株中,共鉴定出3种基因型,分别为F-01、 F-05和F-03。2016年共鉴定出5种基因型,分别 为F01、F02、F03、F05、D02,其中F-01基因型 nbsp;60 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;60 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 菌株24株(75.0),占比最高。2017年共鉴定出 6种基因型。可见黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基 因型多样性逐年增加,F-01基因型为优势基因型, 各年份间F-01基因型所占比例存在差异(图1)。 从采集地点来看(图2) ,哈尔滨市采集分离 的菌株只有F-01和D-02 2种基因型,分别占鉴定 总菌株数的90.0%和10.0%。绥化市采集分离的菌 株SSR基因型最多,有7种,其中F-01基因型47 株(74.6%),占比最高。齐齐哈尔市共鉴定出5种 SSR基因型(图2)。 2.5 马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型分析 根据mtDNA单倍型和SSR基因型,20152017 年黑龙江省采集分离的菌株共划分成9种multi- locus基因型(表2),优势基因型均为multi-locus A 基因型。其中2015年采集分离的马铃薯晚疫病菌 共鉴定出4种multi-locus基因型,2016年共鉴定 出7种multi-locus 基因型,其中multi-locus F基因 型只在2016年分离的菌株中出现。2017年共鉴定 出8种基因型。Multi-locus H基因型和multi-locus I nbsp;表2 黑龙江省分离的马铃薯晚疫病菌采集年份与multi-locus基因型分析 multi-locus基因型 采集年份/个数(占比) 交配型/个数 2015 2016 2017 A1 A2 自育型 总菌株数 A 15(68.2) 18(56.3) 49(68.1) 69 6 7 82 B 3(13.6) 6(18.8) 7(9.6) 15 1 0 16 C 2(9.1) 4(12.5) 6(8.3) 12 0 0 12 D 2(9.1) 1(3.1) 2(2.8) 4 1 0 5 E 0(0) 1(3.1) 1(1.4) 2 0 0 2 F 0(0) 1(3.1) 0(0) 1 0 0 1 G 0(0) 1(3.1) 3(4.2) 4 0 0 4 H 0(0) 0(0) 3(4.2) 3 0 0 3 I 0(0) 0(0) 1(1.4) 1 0 0 1 注AⅡa,F-01;BⅠa,F-01;CⅡa,F-05;DⅡa,F-03;EⅠa,F-03;FⅠa,F-02;GⅡa,D-02;HⅠa,F-06;IⅡa,G-02; 下表同。 图2 采集地区与马铃薯晚疫病菌SSR基因型关系 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/ 年份 2015 2016 2017 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/ 地点 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 10.0 1.6 3.2 1.9 11.3 7.5 77.4 1.9 3.2 9.5 1.6 6.3 74.6 90.0 图1 采集年份与马铃薯晚疫病菌SSR基因型关系 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/ 年份 2015 2016 2017 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/ 地点 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 9.1 9.1 81.8 3.1 12.6 6.2 3.1 75.0 1.4 4.2 4.2 8.2 4.2 77.8 基因型只在2017年分离的菌株中出现。Multi-locus 基因型多样性呈逐年增加的趋势。 从表3可以看出,哈尔滨市采集分离的菌株鉴 定出3种基因型,绥化市采集分离的菌株共鉴定出 9种基因型,其中multi-locus F和multi-locus I基 因型仅在绥化市出现。齐齐哈尔市采集分离的菌株 中共鉴定出7种基因型。表明绥化市各马铃薯主产 区的马铃薯晚疫病菌基因型更为丰富(表3)。 综合上述multi-locus基因型和交配型结果, multi-locus基因型为A基因型的马铃薯晚疫病菌其 交配型类型为A1、A2和自育型,基因型B和基因 型D的马铃薯晚疫病菌其交配型类型为A1和A2。 其余几种multi-locus基因型的马铃薯晚疫病菌交配 型都为A1。 nbsp;61 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;61 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 3 结论与讨论 3.1 马铃薯晚疫病菌交配型 马铃薯晚疫病菌是危害马铃薯、番茄等作物的 一种卵菌纲致病真菌,2012~2013年马铃薯晚疫病 在全国范围内偏重发生,发生范围广且流行快,对 马铃薯造成严重危害(黄冲和刘万才,2016)。 王鹤等(2012)对2009年在黑龙江省采集的 菌株进行交配型检测,结果表明鉴定菌株均为A1 交配型。郭梅等(2015)研究发现,2011~2012 年在黑龙江省哈尔滨、绥化望奎县、齐齐哈尔克 山等地发现大量A2交配型马铃薯晚疫病菌菌株, 2011年A2交配型占被测菌株的23.08;2012年 占被测菌株的30。由此可见,黑龙江省马铃薯 晚疫病菌交配型逐年复杂,但2014年后有关黑龙 江省马铃薯晚疫病菌交配型方面的报道较少。本试 验对2015~2017年在黑龙江马铃薯主产区采集分 离出的晚疫病菌进行交配型测定,研究发现自育型 菌株出现频率逐年增加。从采集地点上发现哈尔 滨市只有A1交配型菌株,绥化市和齐齐哈尔市出 现3种交配型,说明与其他2个地区相比,哈尔滨 市马铃薯晚疫病菌交配型较为单一。这一结论与郭 梅等(2015)的研究结果基本一致。同时也说明绥 化市和齐齐哈尔市马铃薯主产区有可能发生有性生 殖,并导致马铃薯晚疫病菌的遗传多样性更加复 nbsp;杂化。 3.2 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型和SSR基因型 通过测定马铃薯晚疫病菌基因型,可对晚疫病 菌遗传变异进行探究,为防治马铃薯晚疫病提供理 论依据。本试验对2015~2017年在黑龙江各马铃 薯主产区采集的马铃薯晚疫病菌进行mtDNA单倍 表3 黑龙江省分离的马铃薯晚疫病菌采集地区与multi-locus基因型分析 multi-locus基因型 采集地点/个数(占比) 交配型/个数 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 A1 A2 自育型 总菌株数 A 8(80.0) 38(60.3) 36(67.9) 67 8 5 82 B 1(10.0) 10(15.8) 4(7.5) 14 1 0 15 C 0(0) 6(9.5) 6(11.3) 12 0 0 12 D 0(0) 2(3.2) 4(7.5) 4 2 0 6 E 0(0) 1(1.6) 1(1.9) 2 0 0 2 F 0(0) 1(1.6) 0(0) 1 0 0 1 G 1(10.0) 2(3.2) 1(1.9) 4 0 0 4 H 0(0) 2(3.2) 1(1.9) 3 0 0 3 I 0(0) 1(1.6) 0(0) 1 0 0 1 型鉴定,鉴定出Ⅰa和Ⅱa两种单倍型。其中,Ⅱa单 倍型为优势基因型,与张铉哲等(2015)的研究结 果一致,但未发现Ⅰb单倍型菌株。同时,本试验 对晚疫病菌进行SSR基因型测定,与李微(2015) 对2012~2014年黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基 因型测定结果相比,鉴定出新的基因型F-06基因 型。从分离年份上看,2017年黑龙江省晚疫病菌 SSR基因型更为丰富,从采集地区方面分析,绥化 市各马铃薯产区的马铃薯晚疫病菌SSR基因型更多 样化。 3.3 马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型 利用马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基 因型,对马铃薯晚疫病菌的表现型和基因型进行系 统综合分析。本试验中,2017年在黑龙江省采集分 离的晚疫病菌multi-locus基因型最多,说明黑龙江 省马铃薯晚疫病群体结构逐年复杂。从分离地点分 析,绥化市采集分离的马铃薯晚疫病菌multi-locus 基因型最为丰富。交配型与multi-locus基因型综合 分析结果表明,multi-locus A基因型、multi-locus nbsp;B基因型和multi-locus D基因型与交配型没有相关 性,其余multi-locus 基因型与交配型相关。 哈尔滨市各马铃薯主产区马铃薯晚疫病菌 multi-locus基因型多样性较低,说明该地区马铃薯 晚疫病菌遗传结构较为简单;而绥化市采集的马铃 薯晚疫病菌multi-locus基因型最多,表明该地区 马铃薯晚疫病菌群体遗传结构更具多样性。总体来 说,2015~2017年黑龙江省各马铃薯主产区的晚疫 病菌群体结构逐年复杂,给黑龙江省马铃薯晚疫病 的防治带来了新的挑战。绥化市可能是黑龙江省马 铃薯晚疫病的起源中心,未来该地区应加强对马铃 薯晚疫病的监控。 nbsp;62 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;62 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 参考文献 关红颖.2011.黑龙江省马铃薯晚疫病的发生与防治.中国马铃薯, 25(3)173-174. 郭梅,Vincent C,闵凡祥,吕军,高云飞,杨帅,王晓丹,Jean- louis R.2015.黑龙江省发现马铃薯晚疫病菌(Phytophthora nbsp;infestans)A2交配型.中国马铃薯,(3)171-174. 黄冲,刘万才.2016.近几年我国马铃薯晚疫病流行特点分析与监 测建议.植物保护,42(5)142-147. 金光辉,李学湛,王玉成,王腾.2017.年际间干旱对晚疫病菌生 理小种复杂性的影响.植物保护,(4)167-173. 李建武.2011.SSR标记技术在马铃薯遗传育种研究中的应用.中 国蔬菜,(20) 1-8. 李微.2015.黑龙江省马铃薯晚疫病菌群体结构的研究〔硕士论 nbsp;文〕.哈尔滨东北农业大学. 闵凡祥,王晓丹,胡林双,魏琪,董学志,刘伟婷,郭梅.2010. 黑龙江省马铃薯晚疫病菌交配型的研究.中国马铃薯,24(1) 47-49. 王晨.2013.马铃薯晚疫病菌的表现型和SSR基因型分析〔硕士论 文〕.哈尔滨东北农业大学. 王鹤,朱杰华,杨志辉,韩彦卿,王宇,徐小虎.2012.2009年 黑龙江和吉林省马铃薯晚疫病菌表型结构研究.植物保护, 38(1) 151-154. 王立,惠娜娜,李建军,马永强,周天旺,李继平,朱小琼,国立 耕.2013.甘肃省马铃薯主产区晚疫病菌生理小种组成与分 nbsp;布.中国蔬菜,(11)70-74. 王腾,闵凡祥,郭梅,杨帅,高云飞,金光辉.2016.黑龙江省马 铃薯晚疫病菌交配型及对甲霜灵敏感性测定. 植物保护,42 (1)180-183. 吴艳清,蒋继志,郑旭,桂春爽,张紫肖,赵磊.2012.中国东北 部与河北省致病疫霉SSR基因型的组成与分析.中国农学通 报,28(15)170-174. 徐生军.2010.马铃薯晚疫病菌的表现型与基因型的研究〔硕士论 文〕.哈尔滨东北农业大学. 朱杰华.2004.中国马铃薯晚疫病菌群体遗传结构研究〔硕士论 nbsp;文〕.保定河北农业大学. 张铉哲,徐生军.2010.黑龙江省和吉林省马铃薯晚疫病菌multi- locus基因型分析. 中国马铃薯,24(2)97-102. 张铉哲,郝璐,李微,候思宇,赵博,韩晓旭.2015.黑龙江省马 铃薯晚疫病菌交配型、瑞毒霉敏感性及mtDNA单倍型分析. 吉林农业科学,(5)58-62. 张志铭,李玉琴,田世民.1996.中国发生马铃薯晚疫病菌 (Phytophthora infestans)A2交配型.河北农业大学学报,19 (4)63-65. 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The results indicated that 3 mating types of A1,A2 and nbsp; nbsp;63 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;63 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES QuEChERS 法动态监测及评价山西省韭菜 中12 种农药残留 郭丽丽 1花 锦 2* ( 1 山西中医药大学制药与食品工程学院,山西晋中 030619; 2 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 山西太原 030024) 摘 要采用乙腈超声提取,经PSA、C 18 基质分散净化,通过液质联用及气质联用建立了韭菜中吡虫啉、敌敌畏、毒死蜱、 多菌灵、腐霉利、甲胺磷、甲氰菊酯、克百威、六六六、氯丹、 (高效)氯氟氰菊酯、阿维菌素等12种农药的QuEChERS(quick, easy,cheap,effective,rugged,safe)快速检测方法,并对山西省市售韭菜的农药残留状况进行了动态监测和评价。结果表明 山西省韭菜中农药残留的总检出率为80,超标率为20,使用比较多的农药为吡虫啉、敌敌畏、多菌灵、腐霉利、甲氰 菊酯和(高效)氯氟氰菊酯,腐霉利超标是韭菜产品不合格的主要因素。8月后太原及周边地区韭菜中的农药残留水平较高, 且该地区农贸市场与超市韭菜中农药残留的检出率相近,但前者超标率(27.3)明显高于后者(9.1)。 关键词QuEChERS;韭菜;农药残留;监测;评价 nbsp;2012) 。然而韭菜生产中韭蛆、灰霉病等病虫害多 发,种植过程中需要适量使用农药以减少病虫害损 失(Farha et al.,2017)。但是一些菜农为了追求产 量,经常采用灌根的方法将一些高毒农药用于韭蛆 的防治(宋丹 等,2016) ,造成韭菜中农药残留超 标,中毒事件频频发生(王文娇 等,2011)。2017 年11月1日起,山东省全面启动实施韭菜产品“双 证制”管理,严禁无合格证和市场销售凭证 的韭菜产品进入食用农产品市场、生产加工、餐饮 服务环节。这一举措反映出韭菜农药残留问题的日 益严重性,相关部门应加强韭菜中农药残留的监测 郭丽丽,女,讲师,专业方向食品安全与检测,E-mail nbsp; *通讯作者(Corresponding author)花锦,女,工程师,专业方向食 品安全,E-mailhua- 收稿日期2017-12-12;接受日期2018-02-01 基金项目国家认监委检验检疫行业标准项目(2012B131) ,山西中医 药大学博士科研启动项目(2015BK11) 韭菜是我国的特色蔬菜,味道鲜美、香味独特, 具有丰富的营养价值。韭菜含有VC、VB 1 等多种 维生素及矿物质,还含有丰富的纤维素,可以促进 肠道蠕动。韭菜中硫化物的独特辛香味具有一定的 杀菌消炎作用,有助于提高人体免疫力(商飞飞, self-fertility were found in 126 strains isolated,accounting for 88.1,6.3 and 5.6 of the total isolates, respectively. Two mtDNA haplotypes,Ⅰa and Ⅱa,were identified,accounting for 17.5 and 82.5 of the total nbsp;number of isolates,respectively. Seven SSR genotypes,F-01,F-02,F-03,F-05,F-06,D-03 and G-02, were identified from 126 isolates tested. Among them,the F-01 genotype(77.8)was dominant ge/p

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