甘蓝黑腐病和枯萎病兼抗材料的鉴定筛选.pdf

pnbsp;甘蓝黑腐病和枯萎病兼抗材料的鉴定筛选 孔枞枞 刘 星 邢苗苗 杨丽梅 庄 木 张扬勇 王 勇 方智远 *吕红豪 * （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室，北京100081） 摘 要采用喷雾法与浸根法，分别对99份国内外甘蓝种质资源（83份自交系、16份杂交种）进行黑腐病与枯萎病苗期人 工接种抗性鉴定。共筛选出26份抗黑腐病的材料，其中2份表现高抗，即99-192和20-2-5（病情指数＜10） ；同时还筛选 获得引162、奥奇娜、96-100-919等54份高抗枯萎病的材料（病情指数＜10）。其中，秋德、99-192、HB34、JS119、ZL66 为高抗或抗黑腐病兼高抗枯萎病的材料，且JS119和ZL66为早熟、圆球类型材料。进一步对抗性材料的地理来源及主要农 艺性状进行分析，发现83份自交系材料中高抗枯萎病的材料多来自日、韩等国家，且多为早熟、圆球类型；而高抗黑腐病 材料多为晚熟、扁球类型，早熟类型中对黑腐病有较强抗性的材料较少。分别对不同抗性材料配制的16份杂交种进行遗传 分析，结果表明甘蓝黑腐病、枯萎病的抗性分别符合隐性和显性遗传。 关键词甘蓝；黑腐病；枯萎病；兼抗材料；农艺性状 （李明远 等，2006；Jensen et al.，2010）。 甘蓝黑腐病由野油菜黄单胞菌野油菜致病变 种（Xanthomonas campestris nbsp;pv. nbsp;campestris，XCC） 引起，该病自20世纪50年代在我国发现后迅速 蔓延，至80年代已在全国普遍流行（李明远， 1997） 。XCC的传播方式主要为伤口传播、水孔传 播以及种子长距离传播等（Williams，1980；彭锐 和雷建军，1998） 。病原菌侵入植株后快速进入维 管束，在质外体增殖，产生的多糖等分泌物与病 菌一起堵塞木质部导管，限制水分运输，导致植 株叶缘部位呈现“V”型病斑，发病严重时叶脉变 黑，甚至整株萎蔫、死亡，对甘蓝生产造成严重危 害（Alvarez，2000；黄德芬 等，2011；Vicente nbsp;amp; nbsp;Holub，2013） 。甘蓝枯萎病由尖孢镰刀菌粘团专化 型（Fusarium oxysporum nbsp;f. nbsp;sp. nbsp;conglutinans，FOC） 引起，是一种典型的土传病害（Smith，1899；耿 丽华 nbsp;等，2009） ，自21世纪初我国在北京延庆地 区首次发现甘蓝枯萎病，近年来已蔓延至河北、甘 肃、山西、陕西等北方甘蓝主产区，成为危害甘蓝 生产的毁灭性病害（李明远 nbsp;等，2003；张扬 nbsp;等， 2007，2011）。FOC侵入植株后可使叶脉变黄，通 常植株下部叶片先发病，叶脉呈现网状黄化，随后 叶片变黄萎蔫，并逐渐蔓延至整个植株，病株维管 束组织阻塞、变黑褐色，并最终导致整株萎缩死亡 孔枞枞，女，硕士研究生，专业方向蔬菜遗传育种，E-mail nbsp; *通讯作者（Corresponding nbsp;authors） 方智远，男，中国工程院院 士，研究员，博士生导师，主要从事蔬菜遗传育种研究，E-mail ；吕红豪，男，助理研究员，主要从事蔬菜遗传 育种研究，E- 收稿日期2017-12-21；接受日期2018-02-06 基金项目 国 家 重 点 研 发 计 划 项 目（2016YFD0100204， 2017YFD0101804） ，中央级公益性科研院所基本科研业务费项目 （Y2018YJ04，Y2016YJ09），中国农业科学院科技创新工程项目 （CAAS-ASTIP-IVFCAAS），大宗蔬菜产业技术体系项目（nycytx-35- gw01） 结球甘蓝（Brassica oleracea nbsp;L. var. nbsp;capitata L.） 简称甘蓝，在世界各地广泛种植，是重要的十字花 科芸薹属蔬菜作物（方智远，2008，2017）。据联 合国粮农组织（FAO）统计，2014年全世界蔬菜收 获面积2 011.9万hm 2 ，其中甘蓝类蔬菜收获面积达 247.0万hm 2 ，约占12（http//www.fao.org）。目前， 我国甘蓝年栽培面积约90万hm 2 ，占世界甘蓝类 蔬菜收获面积的1/3以上，在蔬菜周年供应和出口 创汇中发挥重要作用（杨丽梅 等，2016） 。 黑腐病和枯萎病是威胁甘蓝生产的两大主要 病害。近年来，随着栽培面积的逐渐增加及不合理 栽培方式的影响（如高密度、连作等） ，其危害程 度日趋严重，两种病害同时为害的情况也时有发生 nbsp; nbsp;22 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;22 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 2018（6）22 - 31 （Sherf amp; Macnab，1986；吕红豪 等，2011）。 早在1955年，Bain就利用甘蓝品种Hugenot 研究发现甘蓝黑腐病抗性受1个或多个显性基因控 制（Bain，1955）。而Williams等（1972）在研究 甘蓝品种富士早生时发现黑腐病抗性受1对隐性 主效基因（ff）控制，杂合时受1对显性（BB）和 1对隐性（aa）修饰基因影响。Dickson和Hunter nbsp;（1987）根据对甘蓝品种PI436606的研究认为黑 腐病抗性受1个单隐性基因控制。Guo等（1991） 通过利用甘蓝型油菜、甘蓝等十字花科作物得出 甘蓝黑腐病抗性遗传受1个或多个显性基因控制 的结论。王晓武（1992）研究认为，甘蓝黑腐病抗 性由隐性基因控制，并存在修饰基因。Vicente等 nbsp;（2002）发现，甘蓝品种Badger nbsp;Inbred-16的黑腐 病抗性受隐性基因控制，支持Williams等（1972） 的观点。由此可见，甘蓝黑腐病的抗性遗传较为复 杂，遗传规律还有待于进一步研究。对于甘蓝枯萎 病而言，其抗性遗传规律较为清楚，总体来说分 为A、B抗型，即A抗型为显性单基因控制，B抗 型为多基因控制；目前，A型抗性已在育种中应用 并成功控制了枯萎病的蔓延（Walker，1930；康俊 根 nbsp;等，2010；吕红豪 nbsp;等，2011；Lv nbsp;et nbsp;al.，2014a， 2014b）。 在对黑腐病和枯萎病的防治方面，传统的化 学（如药剂等） 、物理（如轮作等）等防治方法效 果有限且对环境污染较大，培育抗病品种是最为行 之有效的应对方法（方智远，2008） ；另一方面， 随着甘蓝栽培面积的增加和栽培方式的变化，多种 病害同时造成危害的情况越来越多，因此对高抗、 兼抗品种的需求也愈发强烈。由此可见，为满足 市场需求、培育优良多抗品种，亟待筛选出一批综 合性状优良且具备复合抗性的材料。我国曾在20 世纪80～90年代开展黑腐病育种工作，并筛选出 nbsp;20-2-5等一些晚熟、扁球类型的抗源材料（李树 德，1995） ，而早熟、圆球类型抗黑腐病材料或兼 抗黑腐病与枯萎病材料的筛选国内鲜见报道，对培 育新一代具备复合抗性的甘蓝品种造成了障碍。本 试验通过对99份国内外甘蓝种质资源黑腐病与枯 萎病的抗病鉴定和筛选，为优良、兼抗品种的选育 提供种质资源；同时，获得的高抗和高感黑腐病材 料也将为进一步分析黑腐病抗性遗传规律、挖掘抗 性基因提供基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试黑腐病菌菌株由中国农业科学院蔬菜花卉 研究所植物病理课题组提供，菌株编号为XCBS， 保存于营养琼脂培养基（nutrient nbsp;agar nbsp;medium， NAM），配方为蛋白胨10 nbsp;gL -1 ，牛肉粉3 nbsp;g nbsp;L -1 ，氯化钠5 nbsp;gL -1 ，琼脂15 nbsp;gL -1 ，pH值7.3。 枯萎病菌菌株由本所甘蓝课题组提供，菌株编号为 FGL03-6，保存于完全培养基（complete nbsp;medium， CM） ，配方为酵母提取物6 nbsp;gL -1 ，酶水解酪蛋 白3 nbsp;gL -1 ，酸水解酪蛋白3 gL -1 ，蔗糖10 gL -1 ， 琼脂10 gL -1 。 参试99份甘蓝材料均由本所甘蓝课题组提 供，包括83份自交系和16份杂交种（表1、 2） 。以01-16-5为黑腐病与枯萎病共同感病对照 （CK 1 ） ，以20-2-5为黑腐病的抗病对照（CK 2 ）， 以珍奇为枯萎病的抗病对照（CK 3 ）。 1.2 试验方法 所有参试材料均于2016年9月进行第1次人 工接种鉴定试验，并于2017年5月进行重复试验， 试验地点均为本所南区试验基地。 1.2.1 黑腐病抗性鉴定 采用苗期喷雾法接种，具 体参考李永镐和徐丽波（1990）的方法， 稍作改动。 育苗将参试甘蓝材料种子分别放入50 nbsp;℃热 水中，恒温水浴处理10 nbsp;min，晾干后播种到装有灭 菌土的营养钵（10 nbsp;cm10 nbsp;cm）中，每钵1粒。在 温室内育苗，幼苗生长至4～6片真叶时（约30 nbsp;d 苗龄），选择生长健壮、一致的幼苗进行接种鉴定。 接种① nbsp;接种菌液制备。将黑腐病病菌菌株 XCBS移至营养肉汤培养基（nutrient broth medium， NBM）中，在28 ℃、200 nbsp;rmin -1 条件下摇培 24 nbsp;h，用适量无菌水调节浓度至110 8 nbsp;cfumL -1 （OD 600 0.2） ，备用。② nbsp; 接种方法。接种前将幼苗 移入鉴定室内，浇透水并盖塑料膜保湿12～24 nbsp;h （15～20 nbsp;℃） ，使叶缘吐露。第2天早上用医用喉 头喷雾器将菌液均匀喷洒到植株叶片上，以叶片无 液滴滴落为度。接种后继续保湿24 nbsp;h，除去薄膜后 幼苗于20～25 ℃室温下培养。 病情调查和分级每份甘蓝材料设3组重复， nbsp;23 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;23 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 每重复10株幼苗， 接种后12～15 d调查发病情况。 分级标准为0级，接种叶片无任何症状；1级， 接种叶片水孔处有黑色枯死，无扩展；3级，接 种叶片病斑从水孔向外扩展，占叶面积5以下； 5级，接种叶片病斑从水孔向外扩展，占叶面积 5～25；7级，接种叶片病斑从水孔向外扩展， 占叶面积25～50；9级，接种叶片病斑从水孔 向外扩展，占叶面积50以上（图1）。 病情指数（disease nbsp;index，DI）Σ（病级叶数该病 极值）/（调查总叶数最高病级）100 抗性水平划分依据甘蓝材料的叶片病情级 别，分别计算出DI平均值，进而确定其抗性水平， 划分标准参考李锡香（2008）的方法，并稍作改动。 高抗（HR），0≤DI≤10；抗病（R），10＜DI≤30； 中抗（MR），30＜DI≤50；感病（S），50＜DI≤ nbsp;70；高感（HS），DI＞70。 图1 甘蓝黑腐病叶片病情级别划分标准 彩色图版见中国蔬菜网站veg.org，下图同。 1.2.2 枯萎病抗性鉴定 采用浸根法接种，具体参 考吕红豪等（2011）的方法。 育苗种子消毒方法同1.2.1，晾干后播种在 育苗盘中，幼苗三叶一心期（约30 nbsp;d苗龄）进行 接种鉴定。 接种① nbsp;接种菌液制备。将枯萎病病菌菌株 FGL03-6在CM液体培养基中28 nbsp;℃摇培72 nbsp;h（200 nbsp;rmin -1 ） ，过滤除去菌丝后调节孢子悬浮液浓度至 110 6 nbsp;cfumL -1 ，备用。② nbsp;接种方法。采用浸根 法接种（杨宇红 nbsp;等，2011） ，将幼苗拔起后轻轻抖 落根部泥土，在孢子悬浮液中浸根15 nbsp;min，然后将 幼苗移栽到装有灭菌土的培养钵（10 nbsp;cm10 nbsp;cm） 中，置于温室内培养（白天28 ℃，夜间23 ℃）。 病情调查和分级每份甘蓝材料设3组重复， 每重复8株幼苗，接种后8～10 nbsp;d调查发病情况。 病情分级标准为0级，植株生长正常，无症状； 1级，1片叶叶脉轻微变黄；2级，1～2片叶叶脉 轻微至中度变黄；3级，除心叶外，半数叶片中度 变黄或萎蔫；4级，全部叶片重度变黄或萎蔫；5级， 全部叶片完全萎焉，甚至植株死亡。 病情指数（DI）Σ（发病等级相应级别发病株 nbsp;数）/（调查总株数最高病级）100 抗性水平划分高抗（HR），0≤DI≤10； 抗病（R） ，10＜DI≤30；中抗（MR），30＜DI≤ nbsp;50；感病（S），50＜DI≤70；高感（HS），DI＞70。 1.3 数据处理 利用Excel nbsp;2007软件进行试验数据的统计分 析。对2016～2017年的2次鉴定结果进行整合， 病情指数为2次试验（共6个重复）的平均值。 2 结果与分析 2.1 甘蓝自交系材料对黑腐病及枯萎病的抗性鉴定 2.1.1 甘蓝自交系材料对黑腐病的抗性表现 从表 1可以看出，参试83份甘蓝自交系中，2份材料对 黑腐病表现高抗，即99-192、20-2-5（CK 2 ）， 占 总数的2.4；抗病材料6份，即秋德、富士早生、 HB34、JS119、ZL66、8020，占总数的7.2；中抗 材料18份，占总数的21.7；感病材料37份，占 总数的44.6，高感材料20份，占总数的24.1。 其中，99-192与20-2-5的抗病性最强，表现最好 nbsp;（图2） ，平均病情指数仅为9.9和6.7；在抗病材 料中，JS119和ZL66为首次筛选获得的早熟、圆球 类型抗病甘蓝材料，这4份材料可作为甘蓝黑腐病 抗源材料在今后的抗病育种中利用。 2.1.2 甘蓝自交系材料对枯萎病的抗性表现 从 表1可以看出，参试甘蓝自交系中枯萎病抗性材料 比例较高，且多为高抗，这是因为参试的部分材 料已经过初步田间抗性筛选。其中，高抗枯萎病材 0级 1级 3级 5级 7级 9级 nbsp;24 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;24 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 表1 83份甘蓝自交系材料对黑腐病和枯萎病的抗性鉴定结果 编号 材料名称 来源 熟性 球形 叶色 黑腐病 枯萎病 病情指数 抗性级别 病情指数 抗性级别 KB1 01-16-5（CK 1 ） 加拿大 早 圆 绿 72.22.8 HS 78.14.2 HS KB5 引162 荷兰 早 圆 灰 81.11.8 HS 0 HR KB10 秋德 日本 晚 扁 灰 26.28.2 R 0 HR KB11 富士早生 日本 晚 扁 浅绿 24.52.1 R 82.42.3 HS KB12 99-192 日本 晚 扁 深绿 9.90.1 HR 0 HR KB15 奥奇娜 日本 晚 扁 灰绿 62.56.2 S 0 HR KB16 华扁1 日本 晚 扁 绿 56.65.0 S 0 HR KB23 HB34 日本 晚 扁 灰 26.22.2 R 0 HR KB24 96-109-645 日本 中早 近圆 深绿 48.11.4 MR 17.21.3 R KB27 08-754 美国 早 圆 绿 36.42.5 MR 57.29.4 S KB29 96-100-919 印度 早 圆 灰绿 65.84.3 S 0 HR KB33 HB1180-716 日本 早 圆 深绿 44.00.5 MR 0 HR KB34 HB1180-723 日本 早 圆 深绿 56.91.9 S 0 HR KB35 BJ1012 荷兰 早 圆 灰 42.92.3 MR 12.42.6 R KB36 旺旺871 日本 早 圆 绿 32.94.9 MR 0 HR KB38 205-786 日本 早 圆 深绿 46.63.0 MR 0 HR KB39 205-792 日本 早 圆 深绿 74.32.2 HS 0 HR KB40 205-799 日本 早 圆 深绿 85.22.7 HS 0 HR KB41 207-801 日本 早 圆 绿 83.86.0 HS 0 HR KB42 207-809 日本 早 圆 绿 41.77.1 MR 1.90.7 HR KB44 BJ118 日本 早 圆 绿 82.51.2 HS 0 HR KB46 BJ348 日本 早 圆 绿 63.22.1 S 0 HR KB48 BJ869 日本 早 圆 绿 33.45.6 MR 0 HR KB49 JS119 日本 早 圆 灰 22.44.9 R 0 HR KB50 JS350 日本 早 圆 灰 47.34.0 MR 0 HR KB53 JS885 日本 早 圆 灰 69.22.0 S 0 HR KB54 HN1 日本 中晚 扁 深绿 64.65.2 S 0 HR KB57 1038-1 荷兰 中早 近圆 深绿 47.03.1 MR 0 HR KB58 1038-2 荷兰 中早 近圆 深绿 32.03.0 MR 0 HR KB60 QS9-1 中国 晚 扁 灰 30.74.2 MR 90.70.7 HS KB64 ZL66 日本 早 圆 灰 26.91.8 R nbsp; 2.90.4 HR KB65 非洲甜牛心 赞比亚 晚 尖 绿 72.30.5 HS 82.7.0.1 HS KB67 HN011 日本 早 圆 灰 80.85.6 HS 0 HR KB68 HN035 日本 早 圆 灰 44.62.0 MR 0 HR KB69 觉绿 日本 早 圆 深绿 60.52.8 S 0 HR KB71 20-2-5（CK 2 ） 中国 晚 扁圆 灰 6.72.5 HR 86.60.3 HS KB72 8020 日本 晚 扁 绿 22.56.1 R 72.58.2 HS KB73 21-3 中国 中 扁圆 灰绿 63.02.6 S 72.95.6 HS KB75 夏结229 日本 晚 扁 深绿 58.21.9 S 89.52.4 HS KB76 似柳生 日本 晚 扁 深绿 63.33.7 S 83.65.7 HS KB77 梦舞台252 日本 晚 扁 深绿 68.43.4 S 26.28.2 R KB78 梦舞台253 日本 晚 扁 绿 69.44.6 S 19.42.0 R KB79 HN1 日本 中晚 扁 深绿 63.91.1 S 0 HR KB80 YF308 日本 中 圆 绿 68.32.1 S 0 HR KB81 YF313 日本 中 圆 绿 65.56.8 S 0 HR KB82 华扁2 日本 晚 扁 绿 58.77.6 S 0 HR KB83 春蓝 日本 晚 扁 绿 52.42.4 S 0 HR KB84 1039 荷兰 中早 近圆 深绿 43.81.6 MR 78.53.5 HS KB86 欧圆324 荷兰 中 圆 绿 67.54.8 S 64.72.8 S nbsp;25 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;25 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 编号 材料名称 来源 熟性 球形 叶色 黑腐病 枯萎病 病情指数 抗性级别 病情指数 抗性级别 KB87 欧圆326 荷兰 中 圆 绿 57.50.4 S 54.30.2 S KB88 LY328 日本 早 圆 绿 69.15.7 S 28.51.5 R KB92 HB1186 日本 中早 圆 灰绿 63.73.5 S 23.62.1 R KB94 LY857 日本 早 圆 绿 72.014.7 HS 12.00.7 R KB95 珍奇（CK 3 ） 日本 中早 近圆 灰绿 65.78.9 S 0 HR KB96 似珍奇 日本 中 圆 灰绿 62.34.0 S 0 HR KB97 96-109-646 日本 中早 近圆 深绿 54.20.0 S 24.31.6 R KB98 99-198 韩国 早 圆 灰 58.51.3 S 0 HR KB99 96-100-660 印度 早 圆 灰绿 69.02.2 S 0 HR KB100 CB521 泰国 早 圆 深绿 72.78.2 HS 83.75.3 HS KB101 嘉宝 日本 早 圆 深绿 70.44.3 HS 0 HR KB103 旺旺868 日本 早 圆 绿 55.85.3 S 0 HR KB104 引650绿 荷兰 早 圆 绿 59.52.1 S 0 HR KB107 207-812 日本 早 圆 绿 44.13.6 MR 0 HR KB108 207-820 日本 早 圆 绿 62.70.9 S 0 HR KB109 0102-831 日本 早 圆 灰 59.50.3 S 18.71.2 R KB110 0102-833 日本 早 圆 灰 49.25.5 MR 19.81.6 R KB123 084 丹麦 早 圆 绿 71.25.0 HS 41.33.5 MR KB124 02-12 中国 早 尖 灰绿 76.34.1 HS 77.64.5 HS KB125 01-20中 加拿大 早 圆 绿 72.10.8 HS 83.30.5 HS KB126 01-88 加拿大 早 圆 浅绿 71.70.1 HS 78.64.2 HS KB127 87-534 德国 早 圆 绿 72.85.4 HS 76.95.5 HS KB128 雪早 日本 早 圆 绿 73.21.4 HS 82.05.8 HS KB129 SG643 丹麦 早 圆 绿 59.48.6 S 29.11.4 R KB130 79-156 丹麦 早 圆 浅绿 66.06.1 S 76.74.4 HS KB131 绿球 韩国 早 圆 绿 81.25.2 HS 21.62.2 R KB132 美早473 日本 早 圆 绿 65.66.6 S 75.73.9 HS KB133 美早477 日本 早 圆 绿 66.41.2 S 76.54.3 HS KB134 HN137 日本 早 圆 深绿 64.34.5 S 74.87.4 HS KB135 夏结226 日本 晚 扁 绿 47.73.6 MR 87.18.9 HS KB136 CB516 泰国 早 圆 绿 74.18.8 HS 74.56.2 HS KB137 GlobeStar 日本 早 圆 绿 73.63.7 HS 78.55.9 HS KB138 HB1180-708 日本 早 圆 深绿 55.42.0 S 0 HR KB139 XW721 日本 早 圆 绿 38.77.4 MR 29.02.2 R 注HR高抗，R抗病，MR中抗，S感病，HS高感；下表同。 图2 部分甘蓝自交系黑腐病抗性表现 从左至右依次为高感材料205-799、高抗材料99-192、高感材料205-799、高抗材料20-2-5（CK 2 ）。 （续表） nbsp;26 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;26 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 料43份，占总数的51.8；抗病材料13份，占总 数的15.7；中抗材料1份，占总数的1.2；感病 材料3份，占总数的3.6；高感材料23份，占总 数的27.7。图3为部分甘蓝自交系枯萎病的抗性 nbsp; 表现。 2.1.3 双抗材料的筛选 通过对83份甘蓝自交系 材料进一步分析可知，5份对黑腐病表现高抗或抗 病的材料同时对枯萎病表现高抗，这5份甘蓝材料 分别为秋德、99-192、HB34、JS119、ZL66，均是 优良的双抗种质资源，尤其以99-192表现最好， 对黑腐病和枯萎病均为高抗。另外，还有14份对 黑腐病表现中抗的材料同时对枯萎病表现高抗或抗 图3 部分甘蓝自交系枯萎病抗性表现 从左至右依次为高感材料01-16-5（CK 1 ）、高抗材料96-100-919、高抗材料99-192、高抗材料HB34、高感材料01-20中。 图4 甘蓝黑腐病抗性与地理来源及主要农艺性状的关系 图5 甘蓝枯萎病抗性与地理来源及主要农艺性状的关系 70 60 50 40 30 20 10 0 材料/份 70 60 50 40 30 20 10 0 材料/份 HR R MR S HS HR R MR S HS 地理来源 熟性 日韩 中国 早 中 晚 欧美 其他 叶球类型 扁 圆 尖 叶片颜色 绿 灰绿 灰 70 60 50 40 30 20 10 0 材料/份 70 60 50 40 30 20 10 0 材料/份 HR R MR S HS HR R MR S HS 地理来源 熟性 日韩 中国 早 中 晚 欧美 其他 叶球类型 扁 圆 尖 叶片颜色 绿 灰绿 灰 病。这19份材料作为双抗种质资源，不仅可以用 于甘蓝育种研究，还可用于抗性遗传分析和基因挖 掘等研究，其中ZL66、205-786、JS119、HB1180- 716、BJ1012、旺旺871、BJ869、JS350、HN035、 207-809、207-812、0102-833、XW721为首次筛 选出的早熟类型抗性材料。 2.1.4 甘蓝自交系材料的抗性与地理来源及主要农 艺性状的关系 对表1中不同抗性表现的甘蓝自交 系材料的地理来源及主要农艺性状进行分析发现 （图4、5） ，在地理来源方面，抗黑腐病的26份 自交系大多数来自日本，共计19份，占73.1； 其次是荷兰，为4份；其他抗病材料来自中国和美 国。在57份枯萎病抗病材料中，有46份来自日本， 占80.7，其他抗病材料来自荷兰、印度、韩国、 丹麦。 黑腐病抗性与主要农艺性状的关系从熟性 来看，具有黑腐病抗性的材料大多为早熟材料，为 18份，晚熟材料为8份，无中熟材料，但是高抗 黑腐病的99-192与20-2-5（CK 2 ）却为晚熟材料， 说明早熟性状中高抗黑腐病的材料较少；从叶球类 型来看，圆球类型的抗性材料有19份，占圆球型 材料总数的29.7，扁球类型的材料有7份，占扁 球型材料的41.2，2份尖球类型材料均高感黑腐 nbsp;27 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;27 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES 病；从叶片颜色来看，绿色的抗性材料有16份， 占绿色材料总数的26.7，灰色抗性材料有10份， 占灰色材料总数的66.7，8份灰绿色材料均感病。 枯萎病抗性与主要农艺性状的关系从熟性来 看，具有枯萎病抗性的早熟材料有43份，中熟材 料有3份，晚熟材料有11份，早熟材料居多；从 叶球类型来看，64份圆球类型材料中有46份表现 抗病，占71.9，扁球类型材料中有11份表现抗 病，占扁球型材料总数的64.7，尖球类型材料都 不抗枯萎病；从叶片颜色来看，绿色的抗病材料较 多，为38份，8份灰绿色材料中有6份表现抗病， 还有13份灰色材料表现抗病，占灰色材料总数的 86.7。 总体来说，对甘蓝黑腐病与枯萎病有较高抗性 的材料大多来自于日本、韩国等国家。从农艺性状 来看，高抗或抗黑腐病材料多为晚熟、扁球类型， 且抗性材料很少；对枯萎病而言，由于所选材料已 经过初步田间抗性鉴定，本次鉴定中枯萎病抗性材 料较多，且多为早熟、圆球类型。 2.2 甘蓝杂交组合的抗性及黑腐病抗性遗传规律 初探 从表2可以看出，16份甘蓝杂交组合均对黑 腐病表现感病或高感；但大多对枯萎病具有抗性， 其中11份表现高抗，3份表现抗病。 表2 16份甘蓝杂交组合对黑腐病和枯萎病的抗性表现 编号 杂交组合 亲本材料名称 黑腐病 枯萎病 病情指数 抗性级别 病情指数 抗性级别 KB61 KB29KB11 96-100-919富士早生 63.40.4 S 0 HR KB62 KB125KB11 01-20中富士早生 58.30.3 S 78.70.6 HS KB63 KB127KB11 87-534富士早生 71.41.0 HS 73.40.4 HS KB66 KB129KB127 SG64387-534 58.55.7 S 21.61.5 R KB111 KB78KB135 梦舞台253夏结226 54.00.0 S 23.00.2 R KB112 KB95KB80 珍奇YF308 77.65.7 HS 0 HR KB113 KB95KB81 珍奇YF313 79.86.4 HS 0 HR KB114 KB95KB84 珍奇1039 68.51.6 S 0 HR KB115 KB71KB83 20-2-5春蓝 59.43.7 S 0 HR KB116 KB29KB97 96-100-91996-109-646 77.49.2 HS 0 HR KB117 KB100KB81 CB521YF313 70.80.7 HS 0 HR KB118 KB41KB80 207-801YF308 67.90.1 S 0 HR KB119 KB41KB84 207-8011039 67.30.9 S 0 HR KB120 KB81KB88 YF313LY328 78.78.2 HS 0 HR KB121 KB100KB88 CB521YF328 75.37.9 HS 25.40.2 R KB122 KB80KB92 YF308HB1186 79.07.7 HS 0 HR 在遗传规律方面，由黑腐病抗性材料富士早 生、1039、夏结226、20-2-5以及感病材料96- 100-919、87-534、01-20中、珍奇、207-801、梦舞 台253、春蓝配成的杂交种KB61、KB62、KB63、 KB111、KB114、KB115、KB119对黑腐病均表现 高感或感病，初步推断甘蓝黑腐病为隐性遗传，但 是否为单基因遗传尚不明确，还有待深入研究。 甘蓝枯萎病抗病材料96-100-919、SG643、梦舞 nbsp;台253、珍奇、春蓝、YF313与感病材料富士早生、 87-534、夏结226、1039、20-2-5、CB521配制的 杂交组合KB61、KB66、KB111、KB114、KB115、 KB117均表现抗病，进一步验证了前人关于甘蓝枯 萎病为显性遗传的研究报道（Walker，1930；康俊 根 等，2010；吕红豪 等，2011）。 3 结论与讨论 国外在甘蓝黑腐病育种工作方面起步较早。 在抗源筛选方面，20世纪50年代，Bain（1952） 就利用种子侵染接种法筛选出了富士早生、Hugent 两个对黑腐病有高水平抗性的甘蓝品种。Hunter 等（1987）研究发现了苗期与成株期抗性一致的 PI436609，该品种已经成为甘蓝育种上优良的抗 源材料。国内黑腐病研究工作起步较晚，在20世 纪80～90年代我国才开展抗黑腐病育种工作，且 筛选出的抗病材料多为晚熟材料，几乎没有早熟材 料，也未见兼抗黑腐病与枯萎病甘蓝材料的报道 nbsp;28 nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 nbsp;28 nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 nbsp; nbsp; CHINA VEGETABLES （李树德，1995）。刘佳等（1988）对110份甘蓝 材料进行鉴定后发现8286-1和20-2-5-2两份材料 对黑腐病表现高抗。简元才和钉贯靖久（1994）采 用离体剪叶法在24份甘蓝材料中筛选出91-306、 91-304、91-316等3份抗病材料。张恩慧等 （2001） 采用苗期室内人工接种结合田间自然诱发鉴定的 方法，筛选出甘蓝3种病害（TuMV、黑腐病、 CMV）的抗源材料H8501和B8502。目前，国内外 育种工作者在黑腐病抗源材料筛选上均取得了一定 研究进展，获得了一些优良的抗病材料，但晚熟、 扁球类型材料居多，限制了其在育种中的进一步应 用（彭锐和雷建军，1998）。为了获得新型抗源材料， 国内外学者近年来在不断进行着鉴定筛选工作， Lema等（2012）从256份甘蓝材料中筛选出具有 黑腐病抗性的材料Baln和Quintal nbsp;de nbsp;Alsacia；张 云霞（2014）采用不同的接种方法筛选出了1份稳 定高抗黑腐病的甘蓝材料C7；但鉴定筛选工作进 展较为缓慢，高抗黑腐病中的早熟、优良甘蓝种质 资源仍然较少（张黎黎 nbsp;等，2012） 。因此，抗病育 种工作仍受到较大限制，目前育成的抗黑腐病的栽 培品种也较少。本试验鉴定了99份不同来源的甘 蓝材料（包括83份自交系和16份杂交种）的黑腐 病和枯萎病抗性，筛选出了一批黑腐病抗性种质， 尤其是首次获得了13份优良双抗且早熟的种质资 源，不仅丰富了育种材料，也为下一步培育兼抗或 高抗、早熟品种提供了种质资源。 目前，苗期人工接种已经广泛地应用于植物的 抗病性鉴定，其优点在于试验周期短、速度快，节 省大量人力物力，且环境条件容易控制（崔瑞峰， 2004） 。苗期喷雾法接种和浸根法接种对于鉴定甘 蓝黑腐病和枯萎病来说技术体系较为成熟（龚静 nbsp;等，2001；田仁鹏 nbsp;等，2009） ，方法简便、快速， 能较好地反映不同品种间的抗性水平。本试验采用 苗期喷雾法和浸根法对99份甘蓝材料进行黑腐病 及枯萎病的抗性鉴定，鉴定结果表明不同材料对两 者的抗性表现不尽相同，各材料之间也存在着显著 的差异。同时，本试验探讨了自交系抗性与其地理 来源和主要农艺性状的关系，发现目前国外的抗性 材料较多，尤其是日本，但是在早熟材料中高抗或 抗黑腐病的材料仍然较少。在今后的研究中可利用 鉴定出的抗病种质作为抗源材料，结合常规育种、 单倍体育种、分子辅助选择等育种方法，培育出农 艺性状优良的抗病甘蓝新品种。此外，本试验还初 步分析了甘蓝黑腐病的抗性遗传规律，根据抗、感 杂交组合及亲本的抗性表现，初步判断甘蓝黑腐病 为隐性遗传，支持Dickson和Hunter（1987）、王 晓武（1992）等的观点；也初步佐证了甘蓝枯萎病 为显性遗传的报道（Walker，1930；康俊根 nbsp;等， 2010；吕红豪 nbsp;等，2011） 。然而，甘蓝黑腐病的遗 传规律较为复杂，为探明黑腐病抗性的遗传规律和 抗性机制，还需开展更加系统和深入的工作。 参考文献 崔瑞峰.2004.甘蓝黑腐病苗期抗病性鉴定研究〔硕士论文〕 .晋 nbsp;中山西农业大学. 方智远.2008.甘蓝栽培技术.北京金盾出版社1-7. 方智远.2017.中国蔬菜育种学.北京中国农业出版社542-547. 耿丽华，迟胜起，焦晓辉，康俊根，田仁鹏.2009.北京延庆县甘 蓝枯萎病病原菌的分离及其生物学特性的研究.中国蔬菜， （2）34-37. 龚静，朱玉英，吴晓光.2001.甘蓝黑腐病抗性材料筛选及接种方 法的研究.上海农业科技，（4）87. 黄德芬，李成琼，司军，任雪松，宋洪元.2011.甘蓝黑腐病生理 小种划分及其抗病性鉴定研究进展.中国蔬菜，（18）6-10. 简元才，钉贯靖久.1994.甘蓝黑腐病抗病性材料的鉴定及筛选. 农业新技术，（3）29-30. 康俊根，田仁鹏，耿丽华，陈延阳，简元才，丁云花.2010.甘蓝 抗枯萎病种质资源的筛选及抗性基因分布频率分析.中国蔬 菜，（2）15-20. 李明远.1997.注意防治十字花科黑腐病.蔬菜， （4）23-24. 李明远，张涛涛，李兴红，严红.2003.十字花科蔬菜枯萎病及其 病原鉴定.植物保护，29（6）44-45. 李明远，马永军，姚金亮.2006.警惕十字花科蔬菜枯萎病在我国 蔓延.中国植保导刊，26（1）21-22. 李树德.1995.中国主要蔬菜抗病育种进展.北京科学出版社 617-619. 李锡香.2008.萝卜种质资源描述规范和数据标准.北京中国农 业出版社82-83. 李永镐，徐丽波./p