玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63胞外分泌蛋白对黄瓜白粉病的诱导抗性初报.pdf

p２ ０ 18年 第 5期 Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ａ Ｐ Ｌ Ａ Ｎ Ｔ Ｐ Ｒ Ｏ Ｔ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ ２ ０ 18, Ｖ ｏ ｌ ． ３ 8． Ｎ ｏ ． 5 “ “ “ “ 研 究 报 告 玫 瑰 黄 链 霉 菌 M en - m y co - 93- 63 胞 外 分 泌 蛋 白 对 黄 瓜 白 粉 病 的 诱 导 抗 性 初 报 郭 景 红 1 ， 甄 丹 妹 1 ， 韩 兴 1 ， 耿 绍 阳 1 ， 李 亚 宁 1﹡ ， 刘 大 群 1， 2 （ 1. 河 北 农 业 大 学 植 物 保 护 学 院 /河 北 省 农 作 物 病 虫 害 生 物 防 治 工 程 技 术 研 究 中 心 /国 家 北 方 山 区 农 业 工 程 研 究 中 心 ， 河 北 保 定 071001； 2. 中 国 农 业 科 学 院 研 究 生 院 ， 北 京 100081） 摘 要 为 了 明 确 玫 瑰 黄 链 霉 菌 M en - m y co - 93- 63胞 外 分 泌 蛋 白 是 否 可 诱 导 对 黄 瓜 白 粉 病 的 抗 病 性 ， 通 过 硫 酸 铵 沉 淀 的 方 法 ， 从 M en - m y co - 93- 63的 发 酵 液 中 分 离 出 蛋 白 质 粗 提 物 ， 经 Ｓ Ｄ Ｓ - PA GＥ 电 泳 检 测 ， 蛋 白 质 粗 提 物 相 对 分 子 量 在 15～ 60 k Ｄ 范 围 内 。 该 蛋 白 质 粗 提 物 对 8种 供 试 植 物 病 原 菌 均 未 表 现 出 抑 制 作 用 。 但 能 诱 导 烟 草 的 过 敏 反 应 ， 处 理 12 h 后 ， 处 理 部 位 出 现 水 渍 状 ， 24h 后 出 现 坏 死 斑 。 室 内 盆 栽 试 验 表 明 ， 该 蛋 白 质 粗 提 物 可 以 诱 导 黄 瓜 对 白 粉 病 的 抗 性 ， 诱 抗 效 果 为 54. 49 。 关 键 词 玫 瑰 黄 链 霉 菌 M en - m y co - 93- 63； 诱 导 抗 病 性 ； 过 敏 反 应 ； 防 效 中 图 分 类 号 Ｓ 436.421.12 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 1672-6820（ 2018） 05-0005-05 收 稿 日 期 2017-10-30； 修 回 日 期 2018-02-22 基 金 项 目 国 家 重 点 研 发 计 划 （ 2017Y FＤ 0200900） ； 河 北 省 现 代 农 业 产 业 技 术 体 系 中 药 材 创 新 团 队 项 目 （ HBＣ T 2013040203） 作 者 简 介 郭 景 红 ， 硕 士 研 究 生 ， 研 究 方 向 为 植 物 病 害 生 物 防 治 。 Ｅ - m ai l gu o j i n gh o n g199275 163.co m ﹡ 通 讯 作 者 李 亚 宁 ， 教 授 ， 博 导 ， 研 究 方 向 为 植 物 病 害 生 物 防 治 。 Ｅ - m ai l y an i n g22 163.co m 刘 大 群 ， 教 授 ， 博 导 ， 研 究 方 向 植 物 病 理 学 研 究 。 Ｅ - m ai l l i u daq u n caas .cn 。 Ｐ ｒ ｅ ｌ ｉ ｍ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｎ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s Ｍ ｅ ｎ -ｍ ｙ ｃ ｏ -9３ -６ ３ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｓ ｅ ｃ ｒ ｅ ｔ ａ ｒ ｙ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｔ ｏ Ｃ ｕ ｃ ｕ ｍ ｂ ｅ ｒ ｐ ｏ w ｄ ｅ ｒ ｙ ｍ ｉ ｌ ｄ ｅ w Gu o Ｊ i n gh o n g 1 ,Z h en Ｄ an m ei 1 ,Han Xi n g 1 ,Gen g Ｓ h ao y an g 1 ,Li Y an i n g 1 ,Li u Ｄ aq u n 1, 2 （ 1.Ｃ o l l ege o fPl an t Pr o t ect i o n ,A gr i cu l t u r al Un i v er s i t y o fHebei /Bi o l o gi cal Ｃ o n t r o l Ｃ en t er o fＣ r o p Ｄ i s eas es an d Ｉ n s ect Pes t s o fHebei Pr o v i n ce/Ｎ at i o n al Ｅ n gi n eer i n g Ｒ es ear ch Ｃ en t er f o r A gr i cu l t u r e i n Ｎ o r t h er n M o u n t ai n o u s A r eas ,Bao di n g Hebei 071001,Ｃ h i n a. 2. Gr adu at e Ｓ ch o o l o fＣ h i n es e A cadem y o fA gr i cu l t u r al Ｓ ci en ces ,Bei j i n g 100081,Ｃ h i n a） Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ T o ex p l o r e i n du ced r es i s t an ce o fS t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s M en -m y co -93-63,ex t r acel l u l ar s ecr et ar y p r o t ei n s w er e i s o l at ed f r o m n o n -o r gan i s m f er m en t at i o n s u p er n at an t u s i n g am m o n i u m s u l f at e p r eci p i t at i o n an d t h en s u bj ect ed t o Ｓ Ｄ Ｓ -PA GＥ el ect r o p h o r es i s w i t h m o l ecu l ar w ei gh t s o f15-60 k Ｄ . T h e r es u l t s s h o w ed t h at t h e p r o t ei n h ad n o i n h i bi t i v e ef f ect o n 8 p l an t p at h o gen s w h i l e co u l d i n du ce h y p er s en s i t i v e r eact i o n i n t o bacco l eav es w i t h w at er y l es i o n s an d n ecr o t i c s p o t ap p ear i n g 12 h an d 24 h af t er t r eat m en t . Ｉ n do o r p o t t es t s s h o w ed t h e p r o t ei n co u l d i n du ce cu cu m ber r es i s t an ce t o p o w der y m i l dew w i t h co n t r o l l i n g ef f i ci en cy o f54.49 . Ｋ ｅ ｙ w ｏ ｒ ｄ ｓ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s M en -m y co -93-63;i n du cedr es i s t an ce;h y p er s en s i t i v e r eact i o n ;co n t r o l l i n g ef f ect 5 ２ ０ 1 8 年 第 5 期 Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ａ Ｐ Ｌ Ａ Ｎ Ｔ Ｐ Ｒ Ｏ Ｔ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ ２ ０ 1 8 , Ｖ ｏ ｌ ． ３ 8 ． Ｎ ｏ ． 5 白 粉 病 是 由 子 囊 菌 门 （ As c o m y c o t a ） 白 粉 菌 目 （ Ｅ r y s i p h a l e s ） 真 菌 侵 染 引 起 的 一 种 病 害 ［ 1 ］ 。 白 粉 菌 为 专 性 活 体 寄 生 菌 ， 且 小 种 分 化 众 多 ， 寄 主 广 泛 ， 可 以 侵 染 超 过 1 500个 属 的 植 物 ［ 2 ］ 。 其 中 ， 由 白 粉 菌 引 起 的 瓜 类 白 粉 病 为 害 尤 为 严 重 。 目 前 ， 瓜 类 白 粉 病 的 防 治 主 要 靠 化 学 药 剂 的 使 用 ， 长 期 使 用 化 学 药 剂 容 易 导 致 抗 药 性 和 环 境 污 染 问 题 的 产 生 。 因 此 ， 研 究 生 物 农 药 ， 利 用 蛋 白 类 激 发 子 诱 导 植 物 抗 病 性 控 制 植 物 病 害 成 为 当 前 研 究 的 热 点 ［ 2 ］ 。 蛋 白 质 类 激 发 子 主 要 分 为 3类 ， 分 别 是 过 敏 蛋 白 、 隐 地 蛋 白 、 激 活 蛋 白 等 。 其 中 ， 前 两 者 都 是 通 过 引 起 植 物 产 生 过 敏 性 坏 死 反 应 ， 进 而 使 植 物 产 生 防 卫 反 应 ［ 4 ］ 。 激 活 蛋 白 则 是 通 过 激 活 植 物 体 内 分 子 免 疫 系 统 和 一 系 列 代 谢 调 控 系 统 ， 使 植 物 产 生 抗 病 性 和 防 卫 反 应 ［ 5 ］ 。 目 前 ， 许 多 研 究 已 从 毁 灭 炭 疽 菌 （ Co l l e t o t r i c h u m d e s t r u c t i v u m ） ［ 5 ］ 、 极 细 链 格 孢 （ A l t e r n a r i a t e n u i s s i m a ） ［ 7 ］ 、 大 丽 轮 枝 菌 ［ 8 ］ 等 病 原 微 生 物 的 代 谢 物 中 寻 找 到 蛋 白 激 发 子 ， 诱 导 多 种 植 物 产 生 诱 导 抗 病 性 ， 并 表 现 出 良 好 抗 病 效 果 。 在 研 究 生 防 菌 对 植 物 的 诱 导 系 统 抗 病 性 作 方 面 ， 张 振 华 ［ 9 ］ 用 多 粘 芽 孢 杆 菌 Ｓ QＲ -21诱 导 黄 瓜 对 炭 疽 病 的 抗 病 性 ， 赵 玉 华 等 ［ 1 0 ］ 发 现 ， 樟 树 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 Ｅ BＳ 05诱 导 烟 草 对 TMV系 统 抗 性 ， 王 璐 瑶 等 ［ 1 1 ］ 发 现 ， 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 生 防 菌 株 B1619能 够 诱 导 番 茄 植 株 产 生 系 统 抗 病 性 。 但 大 部 分 研 究 未 对 菌 株 及 其 代 谢 物 中 发 挥 抗 病 作 用 的 物 质 进 行 深 入 研 究 ， 以 获 得 更 加 高 效 和 广 泛 应 用 于 生 产 的 生 物 农 药 。 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Me n - m y c o -93-63是 从 马 铃 薯 疮 痂 病 自 然 衰 退 土 壤 中 分 离 到 的 一 株 对 多 种 植 物 病 原 菌 具 有 抑 制 作 用 的 拮 抗 链 霉 菌 。 前 期 研 究 表 明 ， 该 菌 株 的 发 酵 液 对 黄 瓜 白 粉 病 的 保 护 效 果 达 88.64， 喷 施 其 发 酵 液 后 黄 瓜 叶 片 内 的 POＤ 、 Ｃ AT、 PAL和 PPO 酶 的 活 性 在 一 定 时 间 内 有 明 显 上 升 的 趋 势 ［ 1 2 ］ 。 本 试 验 采 用 硫 酸 铵 分 级 沉 淀 的 方 法 获 得 了 蛋 白 质 粗 提 物 溶 液 ， 验 证 了 其 具 有 诱 导 抗 病 的 生 物 活 性 ， 为 进 一 步 挖 掘 生 防 链 霉 菌 中 蛋 白 类 激 发 子 提 供 了 有 力 依 据 ， 为 获 得 防 治 黄 瓜 白 粉 病 的 新 型 生 物 农 药 提 供 了 参 考 。 1 材 料 与 方 法 1 ． 1 供 试 材 料 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Me n - m y c o -93-63菌 株 ， 由 河 北 农 业 大 学 植 物 保 护 学 院 植 物 病 害 生 物 防 治 实 验 室 保 存 ； 本 生 烟 由 河 北 农 业 大 学 生 命 科 学 学 院 提 供 ； 黄 瓜 白 粉 菌 由 河 北 农 业 大 学 三 园 实 践 园 提 供 ； 黄 瓜 品 种 为 香 农 4号 。 供 试 培 养 基 为 PＤ A培 养 基 和 发 酵 培 养 基 ［ 1 2 ］ （ 葡 萄 糖 2.4， 可 溶 性 淀 粉 0.8， 花 生 饼 粉 1.5， 玉 米 浆 0.8， 氯 化 钠 0.4， 碳 酸 钙 0.3， 磷 酸 二 氢 钾 0.02） 。 1 ． ２ 发 酵 培 养 参 考 张 艳 等 ［ 1 3 ］ 方 法 制 备 Me n -m y c o -93-63发 酵 液 。 1 ． ３ 蛋 白 质 粗 提 物 的 提 取 将 发 酵 液 4 ℃ ， 12 000 r /m i n 离 心 20 m i n ， 取 上 清 液 ， 0.22 μ m 滤 膜 过 滤 去 除 菌 体 。 加 硫 酸 铵 饱 和 溶 液 ， 使 上 清 液 中 硫 酸 铵 的 饱 和 度 达 到 30， 4℃ 静 置 4 h ， 再 次 离 心 （ 4 ℃ ， 10 000 r /m i n ， 15 m i n ） ， 取 上 清 液 加 硫 酸 铵 粉 末 ， 使 上 清 液 中 的 饱 和 度 达 到 80， 4 ℃ 过 夜 ， 离 心 （ 4 ℃ ， 10 000 r /m i n ， 15 m i n ） ， 取 沉 淀 溶 于 适 量 PBＳ 缓 冲 液 （ 20 m m o l /L， p H 7.8） ， 用 相 同 的 缓 冲 液 4 ℃ 透 析 48 h ， 期 间 更 换 4次 缓 冲 液 ， 离 心 （ 4 ℃ ， 8 000 r /m i n ， 15 m i n ） ， 取 上 清 液 ， 在 冷 冻 干 燥 机 中 -50 ℃ 冷 冻 干 燥 成 粉 末 ， 得 到 蛋 白 质 粗 提 物 即 胞 外 分 泌 蛋 白 ， 将 其 在 -20 ℃ 保 存 备 用 。 1 ． 4 蛋 白 含 量 测 定 采 用 生 工 改 良 型 Br a d f o r d 法 蛋 白 浓 度 测 定 试 剂 盒 测 定 蛋 白 浓 度 。 1 ． 5 抑 菌 作 用 测 定 采 用 牛 津 杯 法 测 定 玫 瑰 黄 链 霉 菌 Me n -m y c o -93- 63菌 株 对 8种 供 试 病 原 菌 是 否 具 有 抑 菌 活 性 。 供 试 病 原 菌 有 棉 花 黄 萎 病 菌 （ V e r t i c i l l i u m d a h l i a e ） 、 小 麦 赤 霉 病 菌 （ F u s a r i u m g r a m i n e a r u m ） 、 苹 果 斑 点 落 叶 病 菌 （ A l t e r n a r i a b r a s s i c a e ） 、 梨 黑 斑 病 菌 （ A l t e r n a r i a a l - t e r n a t e ） 、 小 麦 根 腐 病 菌 （ Bi p o l a r i s s o r o k i n i a n a ） 、 苹 果 轮 纹 病 菌 （ Bo t r y o s p h a e r i a b e r e n g e r i a n a ） 、 小 麦 纹 枯 病 菌 （ R h i z o c t o n i a c e r e a l i s ） 、 玉 米 大 斑 病 菌 （ E x s e r o h i l u m t u r c i c u m ） 。 取 100 μ L病 原 菌 孢 子 悬 浮 液 均 匀 涂 布 于 PＤ A培 养 基 平 板 上 ， 将 灭 菌 的 牛 津 杯 轻 轻 置 于 其 6 ２ ０ 18年 第 5期 Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ａ Ｐ Ｌ Ａ Ｎ Ｔ Ｐ Ｒ Ｏ Ｔ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ ２ ０ 18, Ｖ ｏ ｌ ． ３ 8． Ｎ ｏ ． 5 1 M 66 45 35 27 20 14. 4 9. 5 6. 5 4. 1 M .蛋 白 标 准 分 子 量 1.蛋 白 质 粗 提 物 组 分 图 1 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Ｍ ｅ ｎ -ｍ ｙ ｃ ｏ -9３ -６ ３ 菌 株 蛋 白 质 粗 提 物 组 分 Ｓ Ｄ Ｓ -Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 上 ， 向 牛 津 杯 内 加 入 100μ L 蛋 白 质 粗 提 物 溶 液 ， 对 照 的 牛 津 杯 中 加 入 P BＳ 缓 冲 液 。 培 养 3 d 后 ， 观 察 是 否 出 现 抑 菌 圈 。 1．６ 分 子 量 测 定 与 对 烟 叶 过 敏 性 测 定 M e n - m y c o - 93- 63蛋 白 粗 提 液 的 分 子 量 测 定 参 照 郭 尧 君 ［ 1 4 ］的 电 泳 方 法 。 另 选 取 具 有 5～ 7片 长 势 良 好 的 健 康 烟 草 为 材 料 ， 用 1m L 不 带 针 头 的 注 射 器 ， 将 50μ L 蛋 白 质 粗 提 物 溶 液 从 烟 草 叶 子 背 面 注 射 进 叶 片 中 ， 蛋 白 缓 冲 液 作 对 照 。 每 个 处 理 重 复 3次 。 分 别 于 处 理 后 12、 24 h 观 察 是 否 有 过 敏 反 应 的 坏 死 斑 形 成 ， 确 定 蛋 白 质 粗 提 物 是 否 具 有 活 性 ［ 8 ］ 。 1．７ 蛋 白 粗 提 物 溶 液 对 黄 瓜 白 粉 病 诱 导 抗 性 的 测 定 当 黄 瓜 幼 苗 3叶 1心 时 ， 将 幼 苗 随 机 分 成 6组 ， 用 20μ g / m L 的 蛋 白 粗 提 物 溶 液 进 行 喷 雾 处 理 ， 叶 面 挂 满 雾 滴 即 可 。 以 20 m m o L / L P BＳ 缓 冲 液 为 对 照 ， 每 个 处 理 设 3个 重 复 。 喷 雾 处 理 后 24 h ， 喷 雾 接 种 浓 度 约 为 1 10 7 c f u / m L 白 粉 菌 孢 子 悬 浮 液 。 处 理 14 d 后 ， 统 计 发 病 情 况 ， 计 算 病 情 指 数 和 防 治 效 果 。 病 情 分 级 标 准 参 照 Ｄ a a y f 等 ［ 1 5］的 方 法 ， 根 据 病 斑 占 叶 面 积 的 比 例 将 病 情 分 为 0、 1、 2、 3、 4级 。 0级 无 病 斑 ， 叶 片 完 全 健 康 ； 1级 病 斑 面 积 占 整 个 叶 面 积 的 10及 其 以 下 ； 2级 病 斑 面 积 占 整 个 叶 面 积 的 11 ～ 25 ； 3级 病 斑 面 积 占 整 个 叶 面 积 的 26 ～ 50 ； 4 级 病 斑 面 积 占 整 个 叶 面 积 的 50以 上 。 病 情 指 数 和 防 效 计 算 病 情 指 数 ［ Σ （ 各 级 病 叶 数 相 对 级 数 值 ） /（ 调 查 总 叶 数 4） ］ 100 防 效 （ ） ［ 100 - （ 处 理 组 平 均 病 情 指 数 /空 白 组 平 均 病 情 指 数 ） ］ 100 ２ 结 果 与 分 析 ２ ．1 蛋 白 质 粗 提 物 的 提 取 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） M e n - m y c o - 93- 63菌 株 无 菌 体 发 酵 液 上 清 液 经 硫 酸 铵 分 级 沉 淀 提 取 获 得 蛋 白 质 粗 提 物 ， 经 Ｓ Ｄ Ｓ - P AGＥ 电 泳 检 测 ， 与 标 准 蛋 白 M a r k e r 对 比 ， 蛋 白 质 粗 提 物 分 子 量 在 15～ 60 k Ｄ 范 围 内 （ 图 1） 。 ２ ．２ Ｍ ｅ ｎ - ｍ ｙ ｃ ｏ - 9３ - ６ ３ 菌 株 蛋 白 质 粗 提 物 对 8种 病 原 菌 的 抑 菌 活 性 提 取 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） M e n - m y c o - 93- 63菌 株 的 蛋 白 质 粗 提 物 经 冷 冻 干 燥 浓 缩 后 ， 以 2 m g / m L 的 浓 度 对 8种 供 试 病 原 菌 进 行 抑 菌 测 定 。 测 定 结 果 发 现 ， 蛋 白 质 粗 提 物 对 8种 供 试 病 原 菌 均 无 抑 制 作 用 （ 图 2） 。 ２ ．３ 蛋 白 质 粗 提 物 对 烟 草 的 生 物 活 性 鉴 定 提 取 的 蛋 白 质 粗 提 物 经 冷 冻 干 燥 浓 缩 后 ， 以 2 m g / m L 的 浓 度 对 健 康 烟 草 叶 片 进 行 处 理 ， 烟 草 叶 片 出 现 明 显 的 过 敏 性 坏 死 斑 （ 图 3） ， 推 测 该 蛋 白 质 粗 提 物 溶 液 中 含 有 具 有 诱 导 抗 病 生 物 活 性 的 蛋 白 激 发 子 ， 可 以 进 一 步 对 蛋 白 质 粗 提 物 进 行 诱 导 抗 病 的 活 性 验 证 和 分 离 纯 化 ， 以 获 得 单 一 的 蛋 白 激 发 子 。 ２ ．4 蛋 白 质 粗 提 物 诱 导 黄 瓜 对 白 粉 病 的 效 果 处 理 14 d 后 ， 统 计 调 查 结 果 发 现 ， 对 照 组 和 处 理 组 的 病 情 指 数 分 别 为 58.34和 26.55， 其 对 黄 瓜 白 粉 病 的 防 效 为 54.49 ， 表 明 提 取 的 蛋 白 质 粗 提 物 对 黄 瓜 白 粉 病 具 有 诱 抗 保 护 作 用 ， 该 蛋 白 质 粗 提 物 具 有 诱 导 抗 病 活 性 。 7 ２ ０ 1 8 年 第 5 期 Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ａ Ｐ Ｌ Ａ Ｎ Ｔ Ｐ Ｒ Ｏ Ｔ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ ２ ０ 1 8 , Ｖ ｏ ｌ ． ３ 8 ． Ｎ ｏ ． 5 1.蛋 白 质 粗 提 物 引 起 的 坏 死 斑 2.蛋 白 缓 冲 液 图 ３ 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Ｍ ｅ ｎ -ｍ ｙ ｃ ｏ -9 ３ -６ ３ 菌 株 蛋 白 质 粗 提 物 对 烟 草 叶 片 过 敏 性 反 应 小 麦 赤 霉 病 菌 小 麦 根 腐 病 菌 小 麦 纹 枯 病 菌 梨 黑 斑 病 菌 苹 果 斑 点 落 叶 病 菌 苹 果 轮 纹 病 菌 玉 米 大 斑 病 菌 棉 花 黄 萎 病 菌 图 ２ 玫 瑰 黄 链 霉 菌 （ S t r e p t o m y c e s r o s e o f l a v u s ） Ｍ ｅ ｎ -ｍ ｙ ｃ ｏ -9 ３ -６ ３ 菌 株 蛋 白 质 粗 提 物 对 8 种 植 物 病 原 菌 的 平 板 抑 菌 效 果 前 期 研 究 表 明 ， 该 菌 株 的 发 酵 液 对 黄 瓜 白 粉 病 的 保 护 效 果 达 88.64 ， 高 于 该 蛋 白 质 粗 提 物 对 黄 瓜 白 粉 病 的 诱 抗 效 果 ， 分 析 其 原 因 可 能 是 由 于 该 蛋 白 质 粗 提 物 中 目 的 蛋 白 的 浓 度 偏 低 ， 或 者 发 酵 液 中 抗 生 素 等 其 他 组 分 也 具 有 诱 导 植 物 抗 病 性 的 作 用 。 ３ 结 论 与 讨 论 蛋 白 源 激 发 子 在 植 物 的 诱 导 抗 病 方 面 表 现 出 良 好 的 效 果 。 但 目 前 发 现 的 蛋 白 源 激 发 子 大 部 分 是 从 病 原 微 生 物 中 提 取 获 得 的 ， 对 植 物 具 有 促 生 作 用 的 生 防 菌 中 获 得 的 蛋 白 源 激 发 子 很 少 。 王 颢 潜 ［ 1 6］从 侧 短 芽 孢 杆 菌 A 60中 分 离 得 到 的 蛋 白 激 发 子 P e B L 1能 够 诱 导 烟 草 对 病 毒 和 细 菌 性 病 害 的 抗 性 ， 王 宁 波 ［ 1 6］ 从 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 Ｎ Ｃ 6中 分 离 得 到 蛋 白 激 发 子 P e B A 1能 够 诱 导 烟 草 对 灰 霉 病 菌 和 花 叶 病 毒 的 抗 性 ， 张 丽 娜 等 ［ 1 8］ 发 现 从 绛 红 褐 链 霉 菌 中 提 取 的 抗 菌 蛋 白 A M P 能 够 提 高 杂 交 竹 叶 片 中 Ｓ O Ｄ 、 P P O 和 P A L 等 抗 性 酶 的 活 性 ， 降 低 杂 交 竹 梢 枯 病 的 病 情 指 数 。 因 此 ， 生 防 菌 种 中 也 存 在 蛋 白 激 发 子 。 前 期 的 研 究 发 现 玫 瑰 黄 链 霉 菌 M e n - m y c o - 93- 63发 酵 液 及 其 制 剂 对 本 研 究 的 8种 供 试 病 原 菌 均 具 有 良 好 的 抑 制 作 用 ［ 1 9］ ， 而 本 研 究 从 玫 瑰 黄 链 霉 菌 M e n - m y c o - 93- 63中 提 取 获 得 了 胞 外 分 泌 蛋 白 的 粗 品 即 蛋 白 质 粗 提 物 对 这 些 供 试 植 物 病 原 菌 均 无 抑 制 作 用 。 通 过 该 蛋 白 质 粗 提 物 可 以 引 起 烟 草 的 过 敏 性 坏 死 反 应 ， 用 以 检 测 蛋 白 质 粗 提 物 对 黄 瓜 白 粉 病 的 保 护 作 用 ， 验 证 了 该 蛋 白 质 粗 提 物 具 有 诱 导 抗 病 的 生 物 活 性 。 因 此 ， 玫 瑰 黄 链 霉 菌 M e n - m y c o - 93- 63 发 酵 液 中 蛋 白 质 粗 提 物 可 能 通 过 诱 导 抗 病 性 的 方 式 对 植 物 起 作 用 ， 而 不 是 直 接 的 抑 菌 作 用 。 本 研 究 中 该 蛋 白 质 粗 提 物 对 黄 瓜 白 粉 病 的 诱 抗 效 果 较 低 （ 54.49 ） ， 是 否 与 该 蛋 白 质 粗 提 物 中 起 作 用 的 蛋 白 浓 度 偏 低 所 致 ， 需 要 对 其 蛋 白 质 粗 提 物 进 行 进 一 步 的 分 离 纯 化 。 8 ２ ０ 1 8 年 第 5 期 Ｃ Ｈ Ｉ Ｎ Ａ Ｐ Ｌ Ａ Ｎ Ｔ Ｐ Ｒ Ｏ Ｔ Ｅ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ ２ ０ 1 8 , Ｖ ｏ ｌ ． ３ 8 ． Ｎ ｏ ． 5 （ 上 接 第 3 9 页 ） ［ 2］ 冯 明 祥 ， 姜 瑞 德 ， 王 佩 圣 ， 等 . 桃 园 梨 小 食 心 虫 发 生 规 律 研 究 ［ Ｊ ］ . 中 国 果 树 ， 2002 （ 4） 30-31. ［ 3］ 周 洪 旭 ， 董 立 忠 ， 隋 忠 梅 ， 等 . 苹 小 卷 叶 蛾 和 桃 潜 叶 蛾 在 桃 园 中 的 发 生 规 律 ［ Ｊ ］ . 莱 阳 农 学 院 学 报 ， 2005， 22 （ 3） 181-183. ［ 4］ 鹿 金 秋 ， 王 振 营 ， 何 康 来 ， 等 . 桃 蛀 螟 研 究 的 历 史 ， 现 状 与 展 望 ［ Ｊ ］ . 植 物 保 护 ， 2010， 36（ 2） 31-38. ［ 5］ 马 爱 红 ， 李 文 林 ， 路 子 云 ， 等 . 桃 树 梨 小 食 心 虫 发 生 危 害 及 综 合 防 治 ［ Ｊ ］ . 河 北 农 业 科 学 ， 2016， 20（ 4） 27-29. ［ 6］ Bi l a p a t e G G. Li f e t a b l e f o r t h e c a s t o r c a p s u l e b o r e r ， D i - c h o c r o c i s p u n c t i f e r a l i s o n d i f f e r e n t h o s t s ［ Ｊ ］ . Pr o c e e d - i n g s An i m a l Ｓ c i e n c e s ， 1978， 87（ 9） 217-220. ［ 7］ 李 知 行 ， 杨 有 乾 . 桃 树 病 虫 害 防 治 ［ M］ . 北 京 金 盾 出 版 社 ， 2001. ［ 8］ 毕 树 元 ， 张 日 新 ， 刘 德 来 ， 等 . 梨 小 食 心 虫 的 综 合 防 治 ［ Ｊ ］ . 河 北 果 树 ， 2007 （ 3） 42-43. ［ 9］ 赵 卫 东 ， 孙 殿 相 . 桃 潜 叶 蛾 田 间 药 剂 防 治 效 果 ［ Ｊ ］ . 河 北 果 树 ， 1997（ 1） . ［ 10］ 田 宝 良 ， 马 春 森 ， 孔 德 仓 ， 等 . 不 同 果 园 中 主 要 食 心 虫 种 群 监 测 与 防 控 技 术 ［ Ｊ ］ . 植 物 保 护 学 报 ， 2012， 39 （ 1） 7-12 . ［ 11］ 王 桂 春 ， 程 航 ， 韩 秀 君 ， 等 . 梨 小 食 心 虫 成 虫 发 生 规 律 的 气 象 因 子 分 析 ［ Ｊ ］ . 干 旱 气 象 ， 2016， 34（ 2） 356-361. ［ 12］ 司 海 平 . 农 作 物 种 质 资 源 调 查 信 息 系 统 研 究 ［ Ｄ ］ . 北 京 中 国 农 业 科 学 院 ， 2011. ［ 13］ 霍 佳 楠 . 天 津 滨 海 地 区 耐 盐 杨 树 新 品 种 引 种 选 育 研 究 ［ Ｄ ］ . 天 津 天 津 理 工 大 学 ， 2011. 参 考 文 献 ［ 1］ Fe r n n d e z - Or t u ň o Ｄ ， P r e z - Ga r c a A， L p e z - Ｒ u i z F， e t a l . Oc c u r r e n c e a n d d i s t r i b u t i o n o f r e s i s t a n c e t o Qo Ｉ f u n g i - c i d e s i n p o p u l a t i o n s o f Po d o s p h a e r a f u s c a ， i n s o u t h c e n - t r a l Ｓ p a i n ［ Ｊ ］ . Ｅ u r o p e a n Ｊ o u r n a l o f Pl a n t Pa t h o l o g y ， 2006， 115（ 2） 215-222 . ［ 2］ Ki s s L . A r e v i e w o f f u n g a l a n t a g o n i s t s o f p o w d e r y m i l d e w s a n d t h e i r p o t e n t i a l a s b i o c o n t r o l a g e n t s ［ Ｊ ］ . Pe s t Ma n a g e - m e n t Ｓ c i e n c e ， 2003， 59（ 4） 475-483. ［ 3］ 谷 医 林 . 瓜 类 白 粉 病 生 防 菌 LＪ 1的 鉴 定 和 诱 导 抗 病 性 研 究 及 生 物 安 全 性 评 价 ［ Ｄ ］ . 郑 州 河 南 农 业 大 学 ， 2013. ［ 4］ 田 华 ， 朱 艳 梅 ， 董 瑜 ， 等 . 毁 灭 炭 疽 菌 C o l l e t o t r i c h u m d e s t r u c t i v u m 诱 抗 蛋 白 对 烟 草 抗 病 性 的 诱 导 ［ Ｊ ］ . 植 物 保 护 学 报 ， 2017， 44（ 1） 67-74. ［ 5］ 邱 德 文 ， 杨 秀 芬 . 蛋 白 质 农 药 研 究 与 产 业 化 进 展 ［ Ｊ ］ . 中 国 农 业 科 技 导 报 ， 2006（ 6） 1-4. ［ 6］ 田 华 ， 陈 光 勇 ， 董 瑜 ， 等 . 毁 灭 炭 疽 菌 诱 抗 蛋 白 的 分 离 纯 化 及 对 烟 草 抗 病 促 生 作 用 ［ Ｊ ］ . 中 国 烟 草 科 学 ， 2016 （ 4） 68-73. ［ 7］ 李 杰 ， 邱 德 文 ， 杨 秀 芬 ， 等 . 极 细 链 格 孢 菌 66k Ｄ a 激 活 蛋 白 的 纯 化 及 诱 导 烟 草 抗 TMV 的 功 能 ［ Ｊ ］ . 河 北 农 业 大 学 学 报 ， 2008（ 6） 51-54. ［ 8］ 王 炳 楠 ， 杨 秀 芬 ， 曾 洪 梅 ， 等 . 大 丽 轮 枝 菌 分 泌 蛋 白 激 发 子 的 分 离 纯 化 及 生 物 功 能 研 究 ［ Ｊ ］ . 生 物 技 术 通 报 ， 2011（ 11） 166-171. ［ 9］ 张 振 华 . 生 防 多 粘 芽 孢 杆 菌 Ｓ QＲ - 21的 定 殖 与 诱 导 植 物 系 统 抗 性 研 究 ［ Ｄ ］ . 南 京 南 京 农 业 大 学 ， 2011. ［ 10］ 赵 玉 华 ， 周 蕊 ， 李 俊 州 ， 等 . 内 生 细 菌 Ｅ BＳ 05对 烟 草 诱 导 抗 性 的 信 号 转 导 途 径 研 究 ［ Ｊ ］ . 植 物 病 理 学 报 ， 2014, 44（ 5） 527-535. ［ 11］ 王 璐 瑶 ， 蒋 盼 盼 ， 甘 颖 ， 等 . 解 淀 粉 芽 胞 杆 菌 B1619 诱 导 番 茄 防 御 酶 活 性 提 高 和 抗 病 相 关 基 因 的 表 达 上 调 ［ Ｊ ］ . 中 国 生 物 防 治 学 报 ， 2017， 33（ 2） 234-240. ［ 12］ 郭 敬 华 . 玫 瑰 黄 链 霉 菌 Me n - m y c o - 93- 63发 酵 液 防 治 黄 瓜 白 粉 病 的 效 果 及 作 用 机 理 初 探 ［ Ｄ ］ . 保 定 河 北 农 业 大 学 ， 2007. ［ 13］ 张 艳 . 生 防 菌 株 Me n - m y c o - 93- 63发 酵 工 艺 优 化 研 究 ［ Ｄ ］ . 保 定/p