二十个黑木耳菌株的酯酶同工酶分析

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二十个黑木耳菌株的酯酶同工酶分析

北方园艺２０１８（０５）１４９－１５３ＮｏｒｔｈｅｒｎＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ食用菌第一作者简介刘国丽（１９８６－），女，硕士，助理研究员，现主要从事食用菌遗传育种等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌｌｉｕｇｌ１２＠１６３．ｃｏｍ．责任作者张敏（１９７２－），女，博士，研究员，现主要从事食用菌育种及栽培等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌｚｈａｎｇｍｉｎｄｕｎ＠１６３．ｃｏｍ．基金项目辽宁省自然科学基金资助项目（２０１７０５４０５０４）；国家食用菌产业技术体系资助项目（ＣＡＲＳ－２０）。收稿日期２０１７－１０－０９ｄｏｉ１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１７２６５８二十个黑木耳菌株的酯酶同工酶分析刘国丽，李红，吕立涛，张敏（辽宁省农业科学院食用菌研究所，辽宁沈阳１１０１６１）摘要以２０个（Ｍ１～Ｍ２０）黑木耳菌株为试材，采用拮抗试验和酯酶同工酶试验分析了其遗传多样性，以期为辽宁黑木耳的亲缘关系和遗传育种研究提供参考依据。结果表明试验共检出迁移率不同的谱带２１条，２０个菌株间的遗传相似系数变化范围在０．０６０～１．０００。当遗传相异系数为０．５０时，供试菌株被聚成３个类群，Ｍ１和Ｍ９自成一类，其余为第三类。说明绝大多数黑木耳菌株亲缘关系很近，且聚类分析结果与形态观察及拮抗试验结果基本一致。关键词黑木耳；拮抗试验；酯酶同工酶；聚类分析中图分类号Ｓ６４６．６０３．６文献标识码Ａ文章编号１００１－０００９（２０１８）０５－０１４９－０５黑木耳（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａａｕｒｉｃｕｌａ）属担子菌门、层菌纲、木耳目、木耳科、木耳属。又名木耳、细木耳，是我国最先栽培的食用菌之一。黑木耳是我国著名的“山珍”之一，享有“黑色瑰宝”“素中之荤”之美誉，已经成为世界各国广大消费者的美味佳肴。目前市场上黑木耳菌种名目繁多，菌种管理相对滞后，乱引种、乱命名现象比较普遍，导致同名异种或同种异名现象比较严重，老化、退化和劣质菌种流入生产，不仅造成严重的经济损失，还给科研工作带来很多困难，严重影响着黑木耳产业的可持续发展［１］。同工酶指一类具有相同功能，但分别由不同等位基因或不同基因位点编码的蛋白质。由于不同的菌种中同工酶的基因位点不同，同工酶技术能够从本质上揭示菌株间的遗传差异，为杂交亲本的选择提供非常重要的参考依据。现已大量应ＡｂｓｔｒａｃｔＴｏｂｒｅｅｄａｄｅｓｉｒａｂｌｅｌｏｃａｌｖａｒｉｅｔｙｏｆＰｌｅｕｒｏｔｕｓｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｇｏｏｄａｇｒｏｎｏｍｉｃｔｒａｉｔｓｓｕｃｈａｓｈｉｇｈｙｉｅｌｄ，ｇｏｏｄｑｕａｌｉｔｙａｎｄｈｉｇｈｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ，１２ｔｙｐｉｃａｌｓｔｒａｉｎｓｏｆＰ．ｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓｃｏｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｉｎｇａｒｅａｓ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＬＤ１，ＧＹ１８，ＧＹ１６，ＧＹ１６３，ＨＺ３，ＨＺ５，ＨＺＸｉａ，ＨＺ８４５，ＭＹＧｒａｙ，ＭＹＷｈｉｔｅ，ＳＭ，ａｎｄＸＹＸｉｕ－１），ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｎｄｔｈｅｉｒｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｒａｔｅ，ｓｔｒｅｓｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｍｕｓｈｒｏｏｍ－ｂｕｄｄｉｎｇ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｆｒｕｉｔｑｕａｌｉｔｙｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｔｒｉａｌｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｒａｉｎＬＤ１ｗａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｇｏｏｄｖａｒｉｅｔｙｉｎｌｏｃａｌａｒｅａａｓｉｔｓｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｖｉｇｏｒｗａｓｇｏｏｄ，ａｎｄｍｙｃｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｗａｓｔｈｅｆａｓｔｅｓｔ（０．６７ｃｍｄ－１），ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｌｏｗｅｒ（１％），ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｗａｓｈｉｇｈｅｒ（９９．３％），ａｎｄｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｆｒｕｉｔｉｎｇｂｏｄｙｗｅｒｅｇｏｏｄ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｌｅｕｒｏｔｕｓｐｕｌｍｏｎａｒｉｕｓ；ｓｔｒａｉｎｓｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ；ｍｙｃｅｌｉａｇｒｏｗｔｈ；ｍｕｓｈｒｏｏｍ－ｂｕｄｄｉｎｇ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ用于诱变育种的融合子和杂交育种的菌株特性及种质鉴定方面，特别是在食用菌的研究中应用更为广泛［２－６］。该研究对２０个黑木耳的主要栽培品种进行了拮抗试验和酯酶同工酶分析试验，旨在为黑木耳的优良品种选育、种性鉴定及菌种管理等工作提供参考依据。１材料与方法１．１试验材料供试黑木耳菌株共有２０个，品种名及来源见表１。表１黑木耳供试品种Ｔａｂｌｅ１Ａ．ａｕｒｉｃｕｌａｒｓｔｒａｉｎｓｆｏｒｔｈｉｓｓｔｕｄｙ菌株编号ＳｔｒａｉｎＮｏ．品种名Ｓｔｒａｉｎｎａｍｅ来源ＯｒｉｇｉｎｓｏｕｒｃｅｓＭ１“长城１号” 吉林省珲春长城菌业科技开发有限公司Ｍ２“野生１号” 抚顺市清原县采集Ｍ３“木２９” 黑龙江省微生物研究所Ｍ４“纯黑山” 辽宁三友农业生物科技有限公司Ｍ５“野生２号” 黑龙江省海林市山市镇胜利村采集Ｍ６“野生３号” 内蒙古呼伦贝尔市鄂伦春阿荣旗采集Ｍ７“黑优１” 黑龙江省亚布力忠正食用菌研究所Ｍ８“ＭＲ１０” 辽宁三友农业生物科技有限公司Ｍ９“８８８” 大连全禾菌业有限公司Ｍ１０“丰产７” 辽宁省农业科学院食用菌研究所Ｍ１１“神８－７” 吉林省海澜生物技术有限公司Ｍ１２“新科１０” 江苏省江都天达食用菌研究所Ｍ１３“铁１” 铁岭县白旗寨乡凡河源黑木耳种植专业合作社Ｍ１４“春宝” 吉林省海澜生物技术有限公司Ｍ１５“新科４” 江苏省江都天达食用菌研究所Ｍ１６“海元” 吉林省海澜生物技术有限公司Ｍ１７“黑威１５” 抚顺大金禾食用菌有限公司Ｍ１８“丰产王” 辽宁省农业科学院食用菌研究所Ｍ１９“８８９” 大连全禾菌业有限公司Ｍ２０“菊３” 江苏省江都天达食用菌研究所１．２试验方法１．２．１菌种活化挑取供试黑木耳菌丝１ｃｍ２左右接种至综合ＰＤＡ培养基上进行活化，置于２５℃黑暗条件下培养１０ｄ，将菌丝长势强的菌种用于拮抗试验。１．２．２拮抗试验将所有菌株每３个为一组进行组合，每个菌种用直径０．５ｃｍ打孔器打取３个菌丝块，交叉循环，设置３个重复。每平皿接种３个菌株，按“品”字形排列。菌株间距３ｃｍ左右，置于２５℃黑暗条件下培养７ｄ，观察不同菌株间拮抗线形成是否存在及明显情况。１．２．３酯酶同工酶鉴定将活化后的供试菌株转接到液体综合ＰＤＡ培养基上，２５℃、１５０ｒｍｉｎ－１避光培养８～１４ｄ，过滤收集摇瓶中的菌丝体，并用无菌水冲洗干净，滤纸吸干水分，称取０．５ｇ菌丝体放入研钵中，加入适量液氮充分研磨后，装入离心管中，加入等量研磨液，于４℃、１００００ｒｍｉｎ－１离心２０ｍｉｎ。弃去沉淀取上清，置于２ｍＬ离心管中，低温保存备用。采用垂直平板不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳进行酯酶同工酶分析。将样品与４０％蔗糖１∶１（Ｖ／Ｖ）混合后点样，加样量３０～５０μＬ，先低压电泳一段时间，待进入分离胶后再加大到所需电压，电泳在０～４℃冰箱中进行［５］。电泳完毕后，取出凝胶，进行染色和固定，４℃下保存。１．３数据分析根据酯酶同工酶电泳结果，在凝胶上具有相同迁移率的位置上有条带的记为１，无条带的记为０。统计各菌株的同工酶条带信息，采用ＤＰＳ７．０５进行系统聚类分析，得到各菌株同工酶的差异系数矩阵表及聚类树状图，对各菌株进行遗传分析。２结果与分析２．１拮抗试验结果由表２可知，共检测拮抗组合数１５３个，其中Ｍ１与其它供试菌株均有明显的拮抗线（图１－１），说明Ｍ１与其它菌株亲缘关系较远，为独立菌株。Ｍ７与Ｍ２０、Ｍ１０与Ｍ９、Ｍ１５、Ｍ２０，Ｍ１２与Ｍ２０也均有明显的拮抗线。其它组合拮抗反应不明显（图１－２），说明亲缘关系较近或为同株异名。２．２酯酶同工酶的多态性分析由图２可知，在相同的条件下，２０个黑木耳菌株共有２１条酯酶同工酶条带。Ｒｆ值在０．２１８～０．７２４（Ｅ１０．２１８，Ｅ２０．２５９，Ｅ３０．２８２，Ｅ４０．３１８，Ｅ５０．３２９，Ｅ６０．３５３，Ｅ７０．３８８，Ｅ８０．４２６，Ｅ９０．４５９，Ｅ１００．４７６，Ｅ１１０．５０３，Ｅ１２０．５１８，Ｅ１３０．５３５，Ｅ１４０．５４７，Ｅ１５０．５５９，Ｅ１６０．５７６，Ｅ１７０．６１２，Ｅ１８０．６３５，Ｅ１９０．６７６，Ｅ２００．６９４，Ｅ２１０．７２４）。其中，Ｅ１４、Ｅ１６、Ｅ１７为２０个菌株共有０５１北方园艺３月（上）表２拮抗试验结果Ｔａｂｌｅ２Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｅｓｔ菌株编号ＳｔｒａｉｎＮｏ．Ｍ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４Ｍ５Ｍ６Ｍ７Ｍ８Ｍ９Ｍ１０Ｍ１１Ｍ１２Ｍ１３Ｍ１４Ｍ１５Ｍ１６Ｍ１７Ｍ１８Ｍ１９Ｍ２＋＋Ｍ３＋＋Ｍ４＋＋＋Ｍ５＋＋－＋Ｍ６＋＋＋＋＋Ｍ７＋＋＋＋＋－＋Ｍ８＋＋＋＋＋Ｍ９＋＋＋－＋＋＋＋Ｍ１０＋＋－＋＋＋＋＋＋＋Ｍ１１＋＋＋－＋＋＋＋－－Ｍ１２＋＋＋－＋＋－＋－＋Ｍ１３＋＋－＋＋＋＋＋－＋－Ｍ１４＋＋＋－＋＋＋＋＋－－＋Ｍ１５＋＋＋＋＋＋＋－＋＋＋＋＋＋Ｍ１６＋＋＋－＋＋＋＋＋－＋＋－＋Ｍ１７＋＋－－＋＋＋－＋－－－－＋＋Ｍ１８＋＋＋－＋＋＋＋＋－＋－＋－－Ｍ１９＋＋－＋＋＋－＋－＋－Ｍ２０＋＋＋＋＋＋＋－＋＋＋＋＋＋＋－＋＋＋注＋＋表示拮抗反应明显；＋表示有拮抗反应，但是不明显；－无拮抗反应。Ｎｏｔｅ＋＋ｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔａｎｔａｇｏｎｉｓｍｉｓｏｂｖｉｏｕｓ；＋ｉｎｄｉｃａｔｅｓａｎｔａｇｏｎｉｓｍｉｓｎｏｔｏｂｖｉｏｕｓ；－ｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈｅｒｅｉｓｎｏａｎｔａｇｏｎｉｓｍｏｂｓｅｒｖｅｄ．注１．拮抗反应明显；２．拮抗反应不明显。箭头位置为拮抗线。Ｎｏｔｅ１．Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍｉｓｏｂｖｉｏｕｓ；２．Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍｉｓｎｏｔｏｂｖｉｏｕｓ．Ｔｈｅａｒｒｏｗｐｏｓｉｔｉｏｎｓｈｏｗｔｈｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｌｉｎｅ．图１拮抗试验Ｆｉｇ．１Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｅｓｔ的３条基础性共有酶带。菌株Ｍ１谱带分布和其它菌株差异较大，共有２条特有谱带，分别为Ｅ４和Ｅ１５；菌株Ｍ２有１条特有谱带Ｅ１；Ｍ１５有１条特有谱带Ｅ９；Ｍ１９有１条特有谱带Ｅ１３，这些特有谱带可作为菌株与其它菌株鉴别的依据。Ｍ４和Ｍ１１具有相同的酶带，Ｍ６与Ｍ１６、Ｍ１７谱带相同，说明它们具有极相近的亲缘关系，很有可能是同株异名。Ｍ９检测到的条带数最少，仅为４个。２．３聚类分析由表３可知，２０个菌株间的遗传相似系数变化范围在０．０６０～１．０００。部分菌株（Ｍ４和Ｍ１１、Ｍ１０和Ｍ１２、Ｍ６和Ｍ１６、Ｍ６和Ｍ１７、Ｍ１６和Ｍ１７）之间相似系数为１．００，显示它们亲缘关系很近，这些菌株很有可能为同物异名，需要从多个方面予以比较鉴别。从图３可以看出，当遗传相异系数为０．５０时，供试菌株被聚类成３个类群Ｍ１和Ｍ９自成一类，第三类为Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、１５１第５期北方园艺图２供试菌株的同工酶酶谱Ｆｉｇ．２Ｅｓｔｅｒａｓｅｉｓｏｅｎｚｙｍｅｚｙｍｏｇｒａｍｏｆｔｈｅ２０ｓｔｒａｉｎｓ表３２０个黑木耳菌株间的遗传相似性系数Ｔａｂｌｅ３Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆ２０Ａ．ａｕｒｉｃｕｌａｒｓｔｒａｉｎｓ菌株编号ＳｔｒａｉｎＮｏ．Ｍ１Ｍ２Ｍ３Ｍ４Ｍ５Ｍ６Ｍ７Ｍ８Ｍ９Ｍ１０Ｍ１１Ｍ１２Ｍ１３Ｍ１４Ｍ１５Ｍ１６Ｍ１７Ｍ１８Ｍ１９Ｍ２０．０６３Ｍ３０．１８８０．６９０Ｍ４０．１５４０．６４００．６６７Ｍ５０．３３３０．５３００．７８６０．５００Ｍ６０．０７７０．４２００．４６２０．６７００．４２９Ｍ７０．１２５０．７５００．９１７０．７３００．７１４０．５００Ｍ８０．０７１０．６４００．６６７０．７８００．５０００．６６７０．７２７Ｍ９０．１０００．１７００．２３１０．３３００．２１４０．５７１０．２５００．３００Ｍ１００．１３３０．８２００．８３３０．８０００．６４３０．５４６０．９０９０．８０００．２７０Ｍ１１０．１５４０．６４００．６６７１．００００．５０００．６６７０．７２７０．８０００．３３００．８００Ｍ１２０．１３３０．８２００．８３３０．８０００．６４３０．５４６０．９０９０．８０００．２７０１．００００．８００Ｍ１３０．０７１０．６４００．６６７０．６０００．６１５０．６６７０．７２７０．８０００．３３００．８０００．６０００．８００Ｍ１４０．０８３０．３３００．３８５０．５６００．３５７０．８５７０．４１７０．６０００．６７００．４５００．６０００．４５００．５６０Ｍ１５０．２０００．４０００．４３８０．５８００．５０００．６３６０．４６７０．５０００．３６００．５０００．６０００．５０００．４６００．５００Ｍ１６０．０７７０．４２００．４６２０．６７００．４２９１．００００．５０００．７０００．５７００．５５００．７０００．５５００．６７００．９０００．６４０Ｍ１７０．０７７０．４２００．４６２０．６７００．４２９１．００００．５０００．７０００．５７００．５５００．７０００．５５００．６７００．９０００．６４０１．０００Ｍ１８０．０７１０．５０００．５３９０．７８００．４０００．８７５０．５８３０．８０００．５０００．６４００．８０００．６４００．６０００．８０００．５８００．８８００．８８０Ｍ１９０．１２５０．６２００．６４３０．５８００．６０００．６３６０．６９２０．６０００．３６００．７５００．６０００．７５００．７３００．５０００．５７００．６４００．６４００．５８０Ｍ２００．２３１０．３６００．４０００．５５００．４６７０．６０００．４２９０．４０００．４４００．４６００．５０００．４６００．４２００．７０００．８２００．６０００．６０００．５５００．５４０Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ１０、Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ１３、Ｍ１４、Ｍ１５、Ｍ１６、Ｍ１７、Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０。３讨论与结论该研究对目前市场上２０个黑木耳的主要栽培品种进行了拮抗试验和酯酶同工酶分析，得到２０个黑木耳供试菌株的遗传相似系数和聚类分析树状图，初步鉴定了２０个供试菌株之间的亲缘关系。结果表明，２０个黑木耳菌株的酯酶多态性较高，种质资源较为丰富，部分菌株之间酶带相似性极高，可以初步判断这些菌株亲缘关系较近，很有可能是同株异名，例如Ｍ４和Ｍ１１，Ｍ１０和Ｍ１２，Ｍ６和Ｍ１６，Ｍ６和Ｍ１７，Ｍ１６和Ｍ１７，虽然来自不同地区，亲缘关系却很近，这可能与目前我２５１北方园艺３月（上）图３黑木耳菌株聚类分析Ｆｉｇ．３Ｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆ２０Ａ．ａｕｒｉｃｕｌａｒｓｔｒａｉｎｓｂａｓｅｄｏｎｅｓｔｅｒａｓｅｉｓｏｚｙｍｅ国各地互相穿插引种、菌种管理混乱等有关，与唐利华等［２］的研究结论相似。该研究为辽宁省黑木耳优良菌种的选育以及菌种的管理工作提供参考依据。由于酯酶活性受外界因素的影响较大，酯酶同工酶试验的稳定性以及可重复性不高，还需采用ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ等分子标记技术对２０个黑木耳供试菌株进一步分类鉴别。参考文献［１］马云桥，张介弛．黑龙江省黑木耳菌种生产现状及发展对策［Ｊ］．北方园艺，２０１０（１４）２１８－２１９．［２］唐利华，郭倩，王瑞娟，等．中国黑木耳主要栽培菌株酯酶同工酶的研究［Ｊ］．食用菌学报，２００７，１４（４）３７－４０．［３］秦俊哲，谷珅睿，陈合．１４个灵芝菌株的酯酶同工酶分析［Ｊ］．微生物学通报，２００５，３２（４）２０－２４．［４］韦仕岩，王灿琴，覃晓娟，等．金福菇菌株的酯酶同工酶分析［Ｊ］．基因组学与应用生物学，２０１４，３３（５）１０２５－１０３０．［５］李红，肖千明，张敏．辽宁省黑木耳主栽品种的酯酶同工酶分析［Ｊ］．湖北农业科学，２０１５（１７）４２１１－４２１３．［６］边银丙，罗信昌，周启．木耳栽培菌株酯酶同工酶的酶谱多样性研究［Ｊ］．菌物系统，２０００，１９（１）８７－９０．ＥｓｔｅｒａｓｅＩｓｏｚｙｍｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｗｅｎｔｙＳｔｒａｉｎｓｏｆＡｕｒｉｃｕｌａｒｉａａｕｒｉｃｕｌａｒＬＩＵＧｕｏｌｉ，ＬＩＨｏｎｇ，ＬＹＵＬｉｔａｏ，ＺＨＡＮＧＭｉｎ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｄｉｂｌｅＦｕｎｇｉ，ＬｉａｏｎｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ１１０１６１）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｅｓｔａｎｄｅｓｔｅｒａｓｅｉｓｏｚｙｍｅｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ２０ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ（Ｍ１－Ｍ２０）ｏｆＡｕｒｉｃｕｌａｒｉａａｕｒｉｃｕｌａｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｅｓｔｅｒａｓｅｉｓｏｚｙｍｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｓｉｍｉｌａｒｗｉｔｈｔｈｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｅｓｔ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｌａｉｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｋｉｎｓｈｉｐａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｂｒｅｅｄｉｎｇｏｆｂｌａｃｋｆｕｎｇｕｓｉｎＬｉａｏｎｉｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ２１ｂａｎｄｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔＲｆｖａｌｕｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉｌａｒｉｔｙａｍｏｎｇｔｈｅ２０ｓｔｒａｉｎｓｖａｒｉｅｄｆｒｏｍ０．０６０ｔｏ１．０００．Ｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓａｔ５０％ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｌｅｖｅｌｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｌｓｔｒａｉｎｓｃｏｕｌｄｂｅｃｌｕｓｔｅｒｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｆｉｒｓｔｇｒｏｕｐｗａｓＭ１，ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｇｒｏｕｐｗａｓＭ９，ａｌｔｈｅｏｔｈｅｒｓｂｅｌｏｎｇｓｔｏｇｒｏｕｐ３．Ｔｈｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｍｏｓｔｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｈａｄｃｌｏｓｅｄｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＡｕｒｉｃｕｌａｒｉａａｕｒｉｃｕｌａｒ；ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｔｅｓｔ；ｅｓｔｅｒａｓｅｉｓｏｚｙｍｅ；ｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓ３５１第５期北方园艺

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