尖孢镰刀菌F-1对草莓灰霉病防控效果及机制初探.pdf

38 4 840 845 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2022 年 8 月 收稿日期 2022 06 26 基金项目 国家重点研发计划 2019YFD1002000 2022 年度湖南省农业科技创新资金专项 主要经济作物成灾病害生防资源挖掘及利用 作者简介 肖姬玲 助理研究员 E mail jilingxiao 通信作者 博士 研究员 E mail liangzhihuainky DOI 10 16409 ki 2095 039x 2022 04 010 尖孢镰刀菌 F 1对草莓灰霉病防控效果及机制初探 肖姬玲 熊 毅 梁志怀 杨 科 湖南省农业科学院农业生物技术研究所 长沙 410125 摘要 草莓灰霉病是草莓种植期间和采后主要真菌性病害 严重影响草莓的产量和品质 本研究通过离体 试验对比了水杨酸 哈茨木霉 尖孢镰刀菌菌株F 1和F 2防治草莓果实灰霉病发生的效果 发现非致病 性尖孢镰刀菌菌株F 1具有良好的防治效果 田间防效测定结果显示 F 1对草莓灰霉病的防治效果达到 了70 06 与400 g L嘧霉胺悬浮剂的1000倍稀释液的防效相当 进而探讨了该菌防控草莓灰霉病发生 的机制 结果表明该菌株的发酵液能降低灰霉病菌丝的粘附性 对灰葡萄孢孢子萌发的抑制率为19 8 且能诱导提高草莓过氧化氢酶和过氧化物酶的活性 F 1的孢子能有效提高草莓超氧化物歧化酶和过氧化 氢酶的活性 同时接种F 1孢子和发酵液则能最高限度地提高草莓过氧化氢酶 过氧化物酶和超氧化物歧 化酶的活性 最高值分别达到13 6 158 9 和269 U g 关 键 词 草莓灰霉病 尖孢镰刀菌 水杨酸 防御酶活性 中图分类号 S476 1 文献标识码 A 文章编号 1005 9261 2022 04 0840 06 Effect of Non Pathogenic Fusarium oxysporum F 1 on Strawberry Gray Mold and Its Preliminary Mechanism Analysis XIAO Jiling XIONG Yi LIANG Zhihuai YANG Ke Institute of Agricultural Biotechnology Research Hunan Academy of Agricultural Sciences Changsha 410125 China Abstract Gray mold Botrytis cinerea is the main fungal disease of strawberry both during growth and after harvest seriously affecting the yield and quality of strawberry In this study the control effects of salicylic acid Trichoderma harziana and Fusarium oxysporum on the disease in fruits were determined Field tests showed that the non pathogenic F oxysporum F 1 suppressed the disease by 70 06 equal to the efficacy of 1000 times diluted 400g L pyrimethanil suspension Preliminary study on the suppression mechanism of F 1 on postharvest gray mold of strawberry showed that F 1 fermentation broth reduced hyphal adhesion of B cinerea and inhibited germination rate of B cinerea conidia by 19 8 The activities of catalase peroxidase and superoxide dismutase of strawberry could be maximally increased up to 13 6 U g 158 9 U g and 269 U g respectively after 2 days of inoculation of F 1 conidia and fermentation broth The results suggest that F o x y s p o r u m F 1 has the potential to be applied of in control of strawberry gray mold disease Key words strawberry gray mold Fusarium oxysporum salicylic acid defensive enzyme activity 由灰葡萄孢菌 B cinerea Pers 引起的草莓灰霉病 是草莓生殖生长期间和采后主要真菌性病害 严重 影响草莓品质 缩短草莓销售货架期 1 目前 化学防治是防治灰霉病的最有效方法 随着人们对食品安 全和环境保护问题关注程度的增加 寻求安全 高效 环境友好的生物防治方法已成为趋势 2 3 用于灰霉病 防治研究和应用的生防菌株主要包括细菌类的芽胞杆菌 Bacillus spp 假单胞杆菌 Pseudomonas spp 和洋葱伯 克氏菌 Burkholderia cepacia 等 4 6 以及真菌类的酵母菌 Saccharomycetes 和木霉菌 Trichoderma spp 等 7 10 第 4 期 肖姬玲等 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病防控效果及机制初探 841 哈茨木霉菌能够产生抗生素 并通过寄生来控制灰霉菌的生长 具有抗争性 寄生性 抗生性等特性 对 草莓灰霉病表现出较好的防治效果 11 非致病性尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum 菌株在枯萎病类防控上表 型出优异效果 并已有较多的研究报道 但利用非致病性尖孢镰刀菌防控灰霉病相关研究较少 12 水杨酸 salicylicacid SA 是一种广泛存在于植物体内的酚类激素 具有诱导抗病作用 适宜浓度的 SA 处理可 以延缓贮藏期间草莓果实品质下降并抵御灰霉病的发生 13 本试验以 SA 为对照 对比了哈茨木霉和两株 非致病性尖孢镰刀菌菌株对草莓灰霉病的防控作用 发现菌株 F 1 对灰霉病具有较好的防效 继而以化学药 剂嘧霉胺悬浮剂和清水为对照 测定了 F 1 对草莓灰霉病的田间防效 并从拮抗抑菌和诱导抗病两个方面对 该菌防控灰霉病的机制进行探究 旨在明确尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病的生防效果和作用机制 1 材料与方法 1 1 供试材料和仪器 试验用草莓品种为 红颜 果实大小均匀 成熟度一致 无物理损伤 供试菌株 灰葡萄孢 B cinerea 菌株 ACCC37712 来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心 哈茨木霉 Trichoderma harzianum T2 16 尖 孢镰刀菌 F oxysporum 菌株 F 1 和 F 2 均由本实验室从长沙县高桥镇非耕作休闲地分离 接种试验表明 菌株 F 1 和 F 2 对草莓 番茄 甘蓝 白菜和瓜类等十余种常见作物不致病 其他供试试剂包括 CheKine TM Peroxidase POD Activity Colorimetric Assay Kit CheKine TM Phenylalanine Ammonia Lyase PAL Activity Colorimetric Assay Kit 和 CuZn Mn SOD 活性检测试剂盒 WST 8 法 等 供试仪器包括 JXFSTPRP 64 样 品快速研磨仪 Centrifuge 5424R 高速冷冻离心机 HP300G 智能光照培养箱 CX31 OLYMPUS 生物显微 镜 SW CJ 1D 单人单面垂直净化工作台 Thermo Scientific Multiskan FC 酶标仪等 1 2 试验方法 1 2 1 SA 尖孢镰刀菌F 1 尖孢镰刀菌F 2 哈茨木霉对草莓果实灰霉病的防控效果测定 配制浓度为 100 g mL 的 SA 溶液备用 将尖孢镰刀菌菌株 F 1 F 2 哈茨木霉在 PDA 平板上活化 4 d 后用 5 mm 打 孔器在菌落边缘打取菌饼 转接到 PDB 培养基中 28 150 r min 摇培 5 d 四层灭菌擦镜纸过滤获得各 菌株的孢子发酵混液 将孢子浓度调节到 1 10 6 孢子 mL 分别取大小均匀 果质硬实 果表微红的 4 个 草莓放入上述 3 个菌株孢子发酵混液 SA 溶液及 2 份双蒸水中浸泡 20 min 然后放入相应的消毒好的发 芽盒中 其中一份双蒸水处理的 4 个草莓均接种 5 mm 的空白琼脂块 作为空白对照 CK1 另一份接种 5 mm 的灰霉病菌菌饼作为 CK2 其余的各处理每个草莓上接种直径为 5 mm 的灰霉病菌菌饼 置于 20 光 照 12 h 黑暗 12 h 条件下培养 每天观察草莓灰霉病病情发展情况 并拍照 1 2 2 尖孢镰刀菌F 1与灰葡萄孢的平板对峙试验 在同一 PDA 平板上接种尖孢镰刀菌及灰葡萄孢菌菌 饼 5 mm 两菌饼之间间隔 20 mm 设 3 个重复 于 20 黑暗条件下保湿培养 每天观察各菌株 生长情况 并适时拍照 1 2 3 尖孢镰刀菌发酵液对灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的影响 利用 2 m 细菌过滤器去除尖孢镰刀 菌发酵滤液中的孢子 45 水浴 向 50 左右待凝固的 2 PDA 培养基中按体积比 1 1 加入尖孢镰刀菌 发酵滤液 混匀倒入 9 cm 培养皿中凝固后备用 以加等量无菌水的 PDA 培养基作对照 在各平板中央 点种灰葡萄孢菌饼 5 mm 20 保湿培养 每隔 24 h 测量并记录菌落直径 重复 3 次 准备 2 个灭菌的 2 0 mm 离心管中 分别加入 499 L 去除孢子的尖孢镰刀菌发酵液和 ddH 2 O 2 再 分别 加入 1 L 浓度为 5 10 5 孢子 mL 的灰葡萄孢 混匀后置于 20 恒温培养 24 h 后分别统计灰葡萄孢孢 子萌发率 重复 3 次 孢子萌发率 萌发的孢子数 视野内观察的孢子总数 100 1 2 4 F 1对草莓过氧化氢酶 过氧化物酶 超氧化物歧化酶活性的影响 以过氧化氢酶 CAT 过氧 化物酶 POD 超氧化物歧化酶 SOD 活性作为植物抗病性反应的指标 以 SA 为阳性对照 双蒸水 为阴性对照 测定 F 1 孢子和发酵混液及纯发酵液诱导草莓抗性反应的能力 分别取 4 颗洗净后的草莓在 SA 尖孢镰刀菌和双蒸水溶液中浸泡 20 min 转至底部铺上两层双蒸水浸湿滤纸的发芽盒中 20 光 照 12 h 黑暗 12 h 条件下培养 分别于处理后 24 48 和 72 h 取样 POD 活性的测定以 0 5 H 2 O 2 为底物 室温反应 3 min 测定 460 nm 处 OD 值 以每分钟使 OD 减少 0 01 所需酶量为 1 个酶活性单位 U CAT 842 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 活性的测定以甲醇为底物 以 25 条件下每分钟产生 1 mol 甲醛的所需酶量为 1 个酶活性单位 U SOD 酶活性测定采用 WST 8 法 按照各酶活测定说明书测定草莓过氧化氢酶 过氧化物酶 超氧化物歧化酶 活性 重复 3 次 1 2 5 尖孢镰刀菌F 1对灰霉病的田间防控效果测定 2021 年于湖南省长沙市长沙县星沙田间大棚内进行 试验 供试草莓品种为红颜 草莓苗于 10 月 14 日进行移栽 高垄栽培 垄上双行 试验设置 3 个处理 400 g L 嘧霉胺悬浮剂 1000 倍液 孢子浓度为 1 10 6 孢子 mL 的尖孢镰刀菌 F 1 发酵液孢子液 及清水对 照 随机分区 每个小区 80 株苗 发病初期开始施药 在草莓的花 果和叶片的正面和反面均匀喷施 以叶尖滴药为度 12 月 29 日第一次施药 7 d 后再施药 1 次 共施药 3 次 草莓灰霉病田间侵染点以花和 果实为主 第 1 次施药前及每次施药后 7 d 摘除全部成熟果实 分别记录病果数和健果数 计算病果率 和防效 病果率 病果数 总结果数 l00 防效 对照区病果率 处理区病果率 对照区病 果率 100 1 3 数据统计与分析 利用 DPS 7 05 软件对数据进行统计分析 2 结果与分析 2 1 尖孢镰刀菌 F 1 等不同处理对草莓果实灰霉病的防治效果 所有草莓均随着时间的推移逐渐成熟 接种后第 3 d 空白对照 CK1 和尖孢镰刀菌 F 1 处理的草莓无 任何发病症状 CK2 和其他处理的草莓均开始出现典型的灰霉病症状 接种后第 6 d 图 1 空白对照 CK1 仍无发病症状 对照处理 CK2 的草莓均布满灰霉 被灰霉病菌大量侵染 SA 和尖孢镰刀菌 F 2 处理 的大部分草莓受到灰霉病侵染 哈茨木霉处理的草莓灰霉病病斑较少 但生长出大量木霉菌菌落 严重影 响果实品质 F 1 处理的草莓灰霉病病斑最少 且病斑处的病原菌菌丝紧密 菌落生长受到抑制 结果表 明 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病的发生具有较好的防治效果 SA 次之 哈茨木霉菌能有效防控灰霉病 但自身能侵染草莓果实 不适用于草莓结果期灰霉病的防治 图 1 接菌后第 6 d 各条件处理下草莓灰霉病发病情况 Fig 1 Incidence of gray mold of strawberry under various treatments 6 d after inoculation 2 2 尖孢镰刀菌 F 1 与灰霉病的对峙试验 结果显示在 PDA 平板上灰葡萄孢菌的生长速度快于 F 1 两菌落之间并未形成抑菌圈 图 2 无拮 抗作用 第 4 期 肖姬玲等 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病防控效果及机制初探 843 2 3 尖孢镰刀菌 F 1 发酵液对灰葡萄孢菌丝生长 和孢子萌发的影响 灰葡萄孢在加有 50 F 1 发酵液 PDA 平板上 的生长速度与 CK 无显著差异 表 1 表明 F 1 发酵液对灰葡萄孢没有抑制作用 孢子萌发测定 结果显示 24 h 后灰葡萄孢孢子在加有发酵液的培 养液中的孢子萌发率为 66 2 表 1 在对照培 养液中的萌发率为 82 5 说明 F 1 对孢子萌发有 一定的抑制效果 此外 在静置培养时 对照处 理中灰葡萄孢萌发的菌丝聚集在液体表层 形成 了一层粘附膜 而 F 1 发酵液中未形成可见菌膜 说明该菌发酵液有效抑制了灰葡萄孢菌丝的交错 融合和对管壁的附着能力 F 1 发酵液可能会降低 灰葡萄孢菌丝对草莓的附着 从而降低草莓灰霉 病的发生 图 2 接种后第 7 d 尖孢镰刀菌与灰葡萄孢在的 PDA 平板上的 对峙情况 Fig 2 Antagonism between F oxysporum F 1 and B cinerea on PDA plate 7 days after inoculation 表 1 尖孢镰刀菌 F 1 菌株发酵液对灰葡萄孢菌落生长和孢子萌发率的影响 Table 1 Effects of F oxysporum F 1 fermentation broth on colony growth and spore germination rate of B cinerea 处理 Treatment 菌落半径 Colony radius cm 孢子萌发率 Spores germination rate 对照 Control 3 68 0 04 82 5 3 2 50 发酵液 Fermentation broth 3 55 0 04 66 2 2 8 注 数据以平均值 标准差表示 同列数据 后不同小写字母表示差异显著 P 0 05 下同 Note Data were presented as mean SE data with in the same column indicated significantly different P 0 05 The same below 2 4 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓防御酶 CAT POD SOD 活性的影响 F 1 的活性孢子处理草莓后 对草莓 POD 的活性无显著影响 但能有效提高草莓内 CAT 和 SOD 酶的 活性 其活性在处理后的第 2 d 的达到峰值 进而开始下降 在处理后第 4 d 活性与对照处理相当 F 1 的发酵液处理可提高草莓 POD 的活性 在处理后第 2 d 达到峰值 第 3 d 恢复到对照水平 对 CAT 和 SOD 的活性无影响 阳性对照 SA 对 POD 的诱导效果最好 最高值达到 241 U g 对 SOD 的活性也有提高作用 但对 CAT 的活性具有抑制效果 F 1 发酵混液对以上 3 种防御酶均具诱导效果 诱导 SOD 和 CAT 酶的能 力最强 最高值分别达到 269 和 13 6 U g 对 POD 的活性也有一定的提高作用 最高值为 158 9 U g 仅 次于 SA 处理 图 3 由上述结果可知 F 1 可以通过活性孢子和发酵液来调节草莓防御酶活力 进而提 升草莓自身抗性 最终表现为抑制草莓灰霉病的发生 2 5 尖孢镰刀菌 F 1 对灰霉病的田间防控效果 由表 2 可以看到 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病的防效 随着处理次数的增多 防治效果逐渐增强 经过 3 次施药后 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病的防效达到了 70 06 略低于化学药剂嘧霉胺的 3 次用药 效果 表 2 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病的田间防效 Table 2 Field control effect of Fusarium oxysporum F 1 on gray mold of strawberry 施药前 Before treatment 第 1 次施药后 7 天 7 days after the first application 第 2 次施药后 7 天 7 days after the second application 第 3 次施药后 7 天 7 days after the third application 处理 Teatment 病果率 Diseased fruit rate 病果率 Diseased fruit rate 防效 Control effect 病果率 Diseased fruit rate 防效 Control effect 病果率 Diseased fruit rate 防效 Control effect F 1 0 95 0 02 a 1 82 0 40 a 45 83 2 63 0 42 b 63 31 3 35 0 53 a 70 06 嘧霉胺 Pyrimethanil 0 95 0 03 a 1 51 0 42 a 55 05 1 89 0 38 a 73 64 2 67 0 41 a 76 14 对照 CK 0 93 0 03 a 3 36 0 54 b 7 17 0 54 c 11 19 1 02 b 844 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 012345 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 时间 Time d SO D 活性 SO D activ ity Ug 1 FW 0 2 4 6 8 10 12 14 012345 012345 时间 Time d 0 50 100 150 200 250CK SA S F F S 时间 Time d CAT 活性 CAT act ivi ty Ug 1 FW POD 活性 POD acti v i ty U g 1 FW 图 3 各处理对草莓 CAT POD SOD 酶活性的影响 Fig 3 Changes of CAT POD SOD activity in strawberry under different treatment 3 讨论 微生物可以通过各种作用方式防治果蔬病害的发生 作用机制主要包括营养与空间重寄生作用 分泌 次生代谢产物抑制病原菌生长和诱导寄主抗性 14 等 哈茨木霉 T2 16 生长迅速 对灰霉病菌和尖孢镰刀菌 具有较强的拮抗作用 并对草莓 水稻 花生和西瓜等作物具促生诱抗作用 表现出优秀的生防效果 15 16 本研究中 经哈茨木霉孢液处理的草莓上灰霉病菌的生长确实受到了抑制 但成熟期间草莓果实营养丰富 导致哈茨木霉自身在草莓上大量繁殖 严重影响了草莓的品质 因此 哈茨木霉 T2 16 不适用于草莓结果 期对灰霉病的防治 而非致病性尖孢镰刀菌 F 1 不论在离体接种试验中 还是在大田防控中 均对灰霉病 的发生展示出良好的防治作用 尖孢镰刀菌是一类即可营养寄生 又可在土壤中腐生的真菌 非致病性尖孢镰刀菌已被证实对枯萎病 黄萎病和菌核病等多种病害具有生物防治作用 17 19 其中研究较深入且应用较多的是对枯萎病的防治 在 番茄 西瓜 黄瓜 胡麻 芦笋等作物的枯萎病防治方面均有相关报道 20 22 非致病尖孢镰刀菌的生防作 用主要是基于其碳源竞争 侵染点占领和诱导抗性作用 23 24 已有研究表明 非致病性尖孢镰刀菌诱导植 物系统抗性的机制是复杂和多样的 非致病性尖孢镰刀菌 Fo47 处理后的辣椒和番茄 均发生了乙烯 ET 生物合成基因的上调 18 在辣椒中 Fo47 处理后 56 h 提高了辣椒根系 SA 的含量 也增加了与 JA 信号 途径有关的两种化合物 12 氧 植物二烯酸和茉莉 异亮氨酸 的水平 25 此外 对 ET SA 和 JA 信号通 路受损的番茄突变体进行 Fo47 处理后 对枯萎病的防御作用并没有减弱 说明除以上 3 个信号途径外 非致病性尖孢镰刀菌还可通过其他途径增加植株的系统抗性 26 在本研究中发现 非致病性尖孢镰刀菌菌 株 F 1 对灰霉病的生防机制 主要是通过抑制灰葡萄孢孢子萌发 降低灰葡萄孢菌丝的粘附能力和诱导寄 主抗性 3 个方面实现的 虽然尖孢镰刀菌 F 1 在防治草莓灰霉病生物方面表现出较好的效果 但要作为重要生防资源和登记为 产品 仍需在其寄主专化性和对草莓品质的影响多方面开展进一步的研究与风险评估 第 4 期 肖姬玲等 尖孢镰刀菌 F 1 对草莓灰霉病防控效果及机制初探 845 参 考 文 献 1 高怀玲 袁玲 姚文麒 大棚草莓灰霉病防控难点与绿色防控措施 J 现代农业科技 2020 12 140 141 2 邱莉萍 杨肖芳 江景勇 等 5 种杀菌剂防治草莓灰霉病的效果 J 浙江农业科学 2018 59 3 496 497 3 张佳 张璨 芦帆 等 草莓灰霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及抗性菌株的生物学特性研究 J 植物病理学报 2016 46 1 124 130 4 黄静 赵佳 陈哲 等 抗草莓灰霉病的芽孢杆菌 CM3 的分离与筛选 J 北方园艺 2016 11 113 116 5 李德全 钱亚明 周鸣鸣 等 海洋细菌 NH 8 防治草莓灰霉病机理及其抗菌物质分析 J 植物保护学报 2016 43 2 215 221 6 王潇冉 洋葱伯克氏菌 Burkholderia contaminans 对草莓采后灰霉病的生物防治及机理研究 D 太原 山西农业大学 2019 7 郭虹娜 刘佳 奚裕婷 等 拮抗酵母挥发性单体桂皮醛对草莓采后灰霉病的防治 J 食品科学 2020 41 13 212 220 8 王晓妍 张栋园 李宁 等 草莓灰霉菌生防酵母菌的筛选及生防效果测定 J 天津农业科学 2020 26 9 1 4 9 窦国霞 蒋春号 郭虹娜 等 葡萄汁有孢汉逊酵母对采后草莓灰霉病抗性诱导机理研究 J 园艺学报 2019 46 7 1290 1302 10 秦燕 赵永康 王飞 等 哈茨木霉菌与枯草芽孢杆菌复配防治草莓灰霉病 J 中国植保导刊 2021 41 11 54 56 11 张富荣 贾永红 赵永秀 哈茨木霉对设施草莓灰霉病的防治效果 J 北方园艺 2018 409 10 56 59 12 Shishido M Miwa C Usami T et al Biological Control Efficiency of Fusarium Wilt of Tomato by Nonpathogenic Fusarium oxysporum Fo B2 in Different Environments J Phytopathology 2005 95 9 1072 1080 13 王若兰 杨超 赵妍 等 水杨酸处理对草莓采后品质及灰霉病害的影响 J 河南工业大学学报 自然科学版 2013 5 24 28 14 Roca Couso R Flores F lix J D Rivas R Mechanisms of action of microbial biocontrol agents against Botrytis cinerea J Journal of Fungi Basel 2021 7 12 1045 15 田程 张屹 肖姬玲 等 哈茨木霉 T2 16 的 GFP 标记及其生防特性 J 中国生物防治学报 2019 35 2 8 16 魏林 梁志怀 张屹 等 哈茨木霉 T2 16 发酵产物中抗菌促长活性物质的初步研究 C 中国植物保护学会学术年会 2015 17 Veloso J Jos D az The non pathogenic Fusarium oxysporum Fo47 induces distinct responses in two closely related solanaceae plants against the pathogen Verticillium dahliae J Journal of Fungi Basel 2021 7 5 344 18 de Lamo F J Spijkers S B Takken F L W Protection to tomato wilt disease conferred by the nonpathogen Fusarium oxysporum Fo47 is more effective than that conferred by avirulent strains J Phytopathology 2021 111 2 253 257 19 Rodr guez M A Cabrera G Godeas A Cyclosporine A from a nonpathogenic Fusarium oxysporum suppressing Sclerotinia sclerotiorum J Journal of Applied Microbiology 2006 100 3 575 586 20 肖荣凤 郑梅霞 刘波 等 利用响应面法优化非致病性尖孢镰刀菌 FJAT 9290 固体发酵培养基 J 中国生物防治学报 2017 33 2 258 265 21 Freeman S Zveibil A Vintal H et al Isolation of Nonpathogenic Mutants of Fusarium oxysporum f sp melonis for biological control of Fusarium wilt in Cucurbits J Phytopathology 2002 92 2 164 168 22 Reid T C Hausbeck M K Kizilkaya K Use of fungicides and biological controls in the suppression of Fusarium crown and root rot of Asparagus under greenhouse and growth chamber conditions J Plant Disease 2002 86 5 493 498 23 Shcherbakova LA Odintsova T I Stakheev A A et al Identification of a novel small cysteine rich protein in the fraction from the biocontrol Fusarium oxysporum strain CS 20 that mitigates Fusarium wilt symptoms and triggers defense responses in tomato J Frontiers in Plant Science 2015 6 1207 24 Iida Y Ogata A Kanda H et al Biocontrol activity of nonpathogenic strains of Fusarium oxysporum colonization on the root surface to overcome nutritional competition J Frontiers in Microbiology 2022 13 826677 25 Veloso J Alabouvette C Olivain C et al Modes of action of the protective strain Fo47 in controlling Verticillium wilt of pepper J Plant Pathology 2016 65 6 997 1007 26 Constantin M E de Lamo F J Vlieger B V et al Endophyte mediated resistance in tomato to Fusarium oxysporum is independent of ET JA and SA J Frontiers in Plant Science 2019 10 979 责任编辑 吕平香